Xirmada Ogaanshaha Kahortagga Jirka ee Dhexdhexaadinta SARS-CoV-2 (ELISA)
【MABADA】
Xirmada ogaanshaha ka hortagga ee SARS-CoV-2 dhexdhexaadintu waxay ku salaysan tahay habka ELISA ee tartanka ah.
Isticmaalka domainka xidhidhiyaha soo dhaweeyaha la safeeyey (RBD), borotiinka ka soo baxa borotiinka fayraska (S) iyo unugga martida loo yahay
reseptor ACE2, tijaabadan waxaa loogu talagalay in lagu ekaysiiyo dhexgalka ka takhalusida fayraska martida loo yahay.
Calibrators, Xakamaynta Tayada, iyo shaybaarada serum ama balasmaha ayaa si gaar ah si fiican loogu qasaa marka la qaso
kaydka ka kooban hACE2-HRP conjugate oo lagu shubay tuubooyinka yaryar. Kadib isku darka ayaa lagu wareejinayaa gudaha
ceelasha microplate oo ay ku jiraan recombinant recombinant SARS-CoV-2 RBD fragment (RBD)
kuleej. Inta lagu jiro 30-daqiiqo ka-soo-baxa, RBD-ga-hortagga u gaarka ah ee calibrators, QC iyo
muunado ayaa la tartami doona hACE2-HRP si gaar ah loogu xidho RBD-ga aan dhaqaaqin ee ceelasha. Kadib
Ka-soo-baxa, ceelasha waa la dhaqaa 4 jeer si meesha looga saaro isku-xidhka hACE2-HRP ee aan xidhnayn. Xalka
TMB ayaa markaa lagu daraa oo lagu daraa 20 daqiiqo heerkulka qolka, taasoo keentay horumarinta a
midab buluug ah. Horumarinta midabka waa la joojiyaa iyada oo lagu daro 1N HCl, iyo nuugista waa
spectrophotometric ahaan lagu qiyaasay 450 nm. Xoojinta midabka la sameeyay ayaa u dhiganta
qadarka enzym ee jira, oo si liddi ku ah ayay ula xidhiidhaan cadadka heerarka lagu qiimeeyay si la mid ah.
Iyada oo la barbar dhigo qalooca calibration ay sameeyeen calibrators la bixiyay, xooga saarista
ka takhalusidda unugyada difaaca jirka ee muunada aan la garanayn ayaa markaa la xisaabiyaa.
【AALADAHA LOO BAAHAN YAHAY LAAKIIN AAN LA BIXIN】
1. Biyo la miiray ama la miiray
2. Dhuumaha saxda ah: 10μL, 100μL, 200μL iyo 1 ml
3. Talooyinka pipette ee la tuuri karo
4. Akhristaha Microplate oo awood u leh inuu akhriyo nuugista 450nm.
5. Warqad nuug leh
6. Warqada garaafka
7. Isku-dhafka Vortex ama wax u dhigma
【Uruurinta iyo Kaydinta Tuducyada】
1. Shaybaarada serum iyo Plasma ee lagu ururiyay tuubooyinka ay ku jiraan K2-EDTA ayaa loo isticmaali karaa xirmadan.
2. Shaybaarada waa in la daboolaa waxaana lagu kaydin karaa ilaa 48 saacadood 2 °C - 8 °C kahor qiimeynta.
Muunada la hayo waqti dheer (ilaa 6 bilood) waa in la qaboojiyaa hal mar oo keliya marka la gaaro -20 °C kahor baaritaanka.
Iska ilaali wareegyada qaboojinta ee soo noqnoqda.
PROTOCOL
【Diyaarinta Reagent】
1. Dhammaan reagennada waa in laga soo saaraa qaboojiyaha oo loo oggolaado inay ku noqdaan heerkulka qolka ka hor intaan la isticmaalin
(20° ilaa 25°C). Ku kaydi dhammaan reajentiyeyaasha qaboojiyaha isla markiiba isticmaalka ka dib.
2. Dhammaan shaybaarada iyo kontaroolada waa in la vortexed ka hor inta aan la isticmaalin.
3. Diyaarinta Xalka hACE2-HRP: Ku milmi hACE2-HRP 1: 51 saamiga dareeraha oo leh Dilution
Buffer Tusaale ahaan, ku mil 100 μL ee hACE2-HRP fiirsiga 5.0ml ee HRP Dilution Buffer
samee hACE2-HRP xal.
4. 1× Diyaarinta Xalka Dhaq: Ku qas xalinta 20x biyo la miiray ama la miiray
saamiga mugga 1:19. Tusaale ahaan, ku milo 20 ml oo ah 20× Wash Solution 380 ml oo ah fuuqbax ama
biyo la miiray si loo sameeyo 400 mL oo ah 1× Wash Solution.
【Habka Imtixaanka】
1. Tuubooyin kala duwan, aliquot 120μL ee HACE2-HRP Xalka la diyaariyey.
2. Ku dar 6 μL ee calibrators, muunado aan la garanayn, kontaroolada tayada tuubo kasta oo si fiican isku qas.
3. Ku wareeji 100μL isku dar kasta oo lagu diyaariyey tallaabada 2 una beddel ceelasha microplate ee u dhigma.
qaabeynta tijaabada ee horay loo qorsheeyay.
3. Ku dabool saxanka daboolka saxanka oo ku dheji 37°C 30 daqiiqo.
4. Ka saar saxanka daboolka oo ku dhaq saxanka ku dhawaad 300 μL oo ah 1× Wash Solution ceelkiiba afar jeer.
5. Taabo saxanka ku dul shukumaan warqad ah si aad uga saarto dareeraha haraaga ah ee ceelasha ka dib dhaqidda tillaabooyinka.
6. Ku dar 100 μL oo TMB ah ceel kasta oo saxanka ku rid mugdi 20 - 25 ° C 20 daqiiqo.
7. Ku dar 50 μL oo ah Stop Solution ceel kasta si aad u joojiso falcelinta.
8. Ku akhri nuugista akhristaha microplate 450 nm 10 daqiiqo gudahood (630nm sida qalabku yahay
lagu taliyay waxqabad sax ah oo sarreeya).