SARS-CoV-2 中和抗体检测试剂盒 (ELISA)
【原则】
SARS-CoV-2 中和抗体检测试剂盒基于竞争性 ELISA 方法。
使用纯化的受体结合域 (RBD)、病毒刺突 (S) 蛋白和宿主细胞的蛋白质
受体 ACE2，该测试旨在模拟病毒与宿主的中和相互作用。
校准品、质量控制品和血清或血浆样品在稀释液中单独混合均匀
含有 hACE2-HRP 缀合物的缓冲液等分在小管中。然后将混合物转移到
含有固定化重组 SARS-CoV-2 RBD 片段 (RBD) 的微孔板
孵化。在 30 分钟的孵育过程中，校准品、QC 和
样品将与 hACE2-HRP 竞争与孔中固定的 RBD 的特异性结合。后
孵育后，将孔洗涤 4 次以除去未结合的 hACE2-HRP 缀合物。的一个解决方案
然后添加 TMB 并在室温下孵育 20 分钟，从而形成
蓝色。加入1N HCl停止显色，吸光度为
分光光度法在 450 nm 处测量。形成的颜色强度与
存在的酶的量，并且与以相同方式测定的标准品的量成反比。
通过与所提供的校准品形成的校准曲线比较，
然后计算未知样品中的中和抗体。
【需要但未提供的材料】
1.蒸馏水或去离子水
2. 精密移液器：10μL、100μL、200μL、1 mL
3. 一次性移液器吸头
4. 酶标仪可读取 450nm 处的吸光度。
5、吸水纸
6.方格纸
7. 涡旋混合器或同等设备
【样本采集和储存】
1. 本试剂盒可使用收集在含有 K2-EDTA 的试管中的血清和血浆样本。
2. 检测前，样本应加盖并可在 2 °C - 8 °C 下保存最多 48 小时。
保存时间较长（最多 6 个月）的样本在检测前仅应在 -20 °C 下冷冻一次。
避免反复冻融循环。
协议
【试剂制备】
1. 所有试剂在使用前必须从冷藏状态取出并恢复至室温
（20° 至 25°C）。所有试剂使用后立即保存在冰箱中。
2. 所有样品和对照品在使用前均应涡旋。
3. hACE2-HRP溶液制备：将hACE2-HRP浓缩液以1:51的稀释比稀释
缓冲。例如，用 5.0mL HRP 稀释缓冲液稀释 100 μL hACE2-HRP 浓缩液
制作 hACE2-HRP 解决方案。
4. 1× 清洗液配制：用去离子水或蒸馏水稀释 20× 清洗液，
体积比为1：19。例如，用 380 mL 去离子或
蒸馏水制成 400 mL 的 1× 清洗溶液。
【测试程序】
1. 在单独的试管中，分装 120μL 准备好的 hACE2-HRP 溶液。
2. 在每个管中添加 6 μL 校准品、未知样品、质控品并充分混合。
3. 将步骤 2 中制备的各混合物 100μL 转移至相应的微孔板孔中。
预先设计的测试配置。
3. 用 Plate Sealer 盖住板并在 37°C 下孵育 30 分钟。
4. 取下封板膜，每孔用约 300 μL 1× 清洗液清洗板四次。
5. 洗涤步骤后，用纸巾轻拍板以除去孔中的残留液体。
6. 向每个孔中添加 100 μL TMB 溶液，并在 20 - 25°C 下避光孵育板 20 分钟。
7. 每孔加入 50 μL Stop Solution 以终止反应。
8. 10 分钟内读取酶标仪在 450 nm 处的吸光度（630 nm 作为附件）
推荐用于更高精度的性能）。