SARS-COV-2中和抗体检测试剂盒（ELISA）
【原则】
SARS-COV-2中和抗体检测试剂盒基于竞争性ELISA方法。
使用纯化的受体结合结构域（RBD），病毒尖峰（S）蛋白的蛋白质和宿主细胞
该测试受体ACE2旨在模仿病毒宿主中和相互作用。
校准器，质量控制以及血清或血浆样品单独混合稀释
含有HACE2-HRP共轭物的缓冲液在小管中等分。然后将混合物转移到
含有固定重组SARS-COV-2 RBD片段（RBD）的微板孔
孵化。在30分钟的孵育过程中，校准器，QC和
样品将与HACE2-HRP竞争，以特异性结合固定在井中的RBD。后
温育，将井洗4次，以去除未结合的HACE2-HRP结合物。解决方案
然后在室温下添加TMB并在
蓝色。添加1N HCl可以停止颜色开发，并且吸光度为
在450 nm处通过分光光度法测量。形成的颜色的强度与
存在的酶量，与以相同方式分析的标准量成反比。
通过与所提供校准器形成的校准曲线进行比较，
然后计算未知样品中中和抗体。
【需要但未提供的材料】
1。蒸馏或去离子水
2。精密移液器：10μL，100μL，200μL和1 ml
3。一次性移液器提示
4。读取器，能够在450nm时读取吸光度。
5。吸收纸
6
7。涡流混合器或同等的
【标本收集和存储】
1。在包含K2-EDTA的管中收集的血清和血浆样品可用于该试剂盒。
2。标本应盖帽，并在测定前在2°C -8°C下储存长达48小时。
测定前，在-20°C下仅将持有更长的时间（最多6个月）冷冻一次。
避免重复的冻融周期。
协议
【试剂制备】
1。所有试剂必须从冷藏中取出，并允许在使用前返回室温
（20°至25°C）。使用后立即将所有试剂保存在冰箱中。
2。使用前所有样品和控件都应涡旋。
3。HACE2-HRP溶液制备：以稀释比以1：51稀释的HACE2-HRP浓缩物稀释
缓冲。例如，用5.0毫升HRP稀释缓冲液稀释100μLHACE2-HRP浓缩液
制作HACE2-HRP解决方案。
4。1×洗涤溶液制备：用去离子或蒸馏水稀释20倍洗涤溶液
体积比1:19。例如，用380 ml的去离子化或
蒸馏水以制成400毫升1倍洗涤溶液。
【测试程序】
1。在单独的试管中，等分的120μl制备的HACE2-HRP溶液。
2。加入6μl校准器，未知样品，每个管中的质量控制，并充分混合。
3。在步骤2中制备的每种混合物的100μl将根据相应的微板孔根据
到预先设计的测试配置。
3。用板密封剂覆盖板，并在37°C下孵育30分钟。
4。卸下板密封剂，并用大约300μl的每井清洗大约300μl1×清洗溶液四次。
5。在洗涤台阶后，将盘子在纸巾上敲击以除去井中的残留液体。
6。将100μLTMB溶液加到每个孔中，并在20-25°C的黑暗中孵育20分钟。
7。将50μl的停止溶液添加到每个孔中以停止反应。
8。在10分钟内以450 nm的450 nm读取微调读取器的吸光度（630nm作为附件为
建议以提高精度性能）。