OEM 制造商中国 Medomics 传染性 COVING 病毒中和抗体检测试剂盒带 CE 标志和白名单
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【原则】
SARS-CoV-2中和抗体检测试剂盒基于竞争性 ELISA 方法。
使用纯化的受体结合域 (RBD)、病毒刺突 (S) 蛋白和宿主细胞的蛋白
受体 ACE2,该测试旨在模拟病毒与宿主的中和相互作用。
校准品、质量控制品和血清或血浆样品在稀释液中单独混合均匀
含有 hACE2-HRP 缀合物的缓冲液等分在小管中。然后将混合物转移到
含有固定化重组 SARS-CoV-2 RBD 片段 (RBD) 的微孔板
孵化。在 30 分钟的孵育过程中,校准品、QC 和
样品将与 hACE2-HRP 竞争与孔中固定的 RBD 的特异性结合。后
孵育后,将孔洗涤 4 次以除去未结合的 hACE2-HRP 缀合物。的一个解决方案
然后添加 TMB 并在室温下孵育 20 分钟,从而形成
蓝色。加入1N HCl停止显色,吸光度为
分光光度法在 450 nm 处测量。形成的颜色强度与
存在的酶的量,并且与以相同方式测定的标准品的量成反比。
通过与所提供的校准品形成的校准曲线比较,
然后计算未知样品中的中和抗体。
【需要但未提供的材料】
1.蒸馏水或去离子水
2. 精密移液器:10μL、100μL、200μL、1 mL
3. 一次性移液器吸头
4. 酶标仪可读取 450nm 处的吸光度。
5、吸水纸
6.方格纸
7. 涡旋混合器或同等设备
【样本采集和储存】
1. 本试剂盒可使用收集在含有 K2-EDTA 的试管中的血清和血浆样本。
2. 检测前,样本应加盖并可在 2 °C – 8 °C 下保存最多 48 小时。
保存时间较长(最多 6 个月)的样本在检测前仅应在 -20 °C 下冷冻一次。
避免反复冻融循环。
协议
【试剂制备】
1. 所有试剂在使用前必须从冷藏状态取出并恢复至室温
(20° 至 25°C)。所有试剂使用后立即保存在冰箱中。
2. 所有样品和对照品在使用前均应涡旋。
3. hACE2-HRP溶液制备:将hACE2-HRP浓缩液按1:51的稀释比例稀释
缓冲。例如,用 5.0mL HRP 稀释缓冲液稀释 100 μL hACE2-HRP 浓缩液
制作 hACE2-HRP 解决方案。
4. 1× 清洗液配制:用去离子水或蒸馏水稀释 20× 清洗液,
体积比为1:19。例如,用 380 mL 去离子或
蒸馏水制成 400 mL 的 1× 清洗溶液。
【测试程序】
1. 在单独的试管中,分装 120μL 准备好的 hACE2-HRP 溶液。
2. 在每个管中添加 6 μL 校准品、未知样品、质控品并充分混合。
3. 将步骤 2 中制备的各混合物 100μL 转移至相应的微孔板孔中。
预先设计的测试配置。
3. 用 Plate Sealer 盖住板并在 37°C 下孵育 30 分钟。
4. 取下封板膜,每孔用约 300 μL 1× 清洗液清洗板四次。
5. 洗涤步骤后,用纸巾轻拍板以除去孔中的残留液体。
6. 将 100 μL TMB 溶液添加到每个孔中,并将板在 20 – 25°C 下避光孵育 20 分钟。
7. 每孔加入 50 μL Stop Solution 以终止反应。
8. 10 分钟内读取酶标仪在 450 nm 处的吸光度(630 nm 作为附件)
推荐用于更高精度的性能)。