Ohun elo Wiwa Antibody (ELISA) SARS-CoV-2 Neutralizing
【ÌLÀNÀ】
Ohun elo Iwari Antibody ti SARS-CoV-2 da lori ilana ELISA ifigagbaga.
Lilo agbegbe abuda olugba ti a sọ di mimọ (RBD), amuaradagba lati ọlọjẹ ọlọjẹ (S) ati sẹẹli agbalejo
olugba ACE2, idanwo yii jẹ apẹrẹ lati ṣe afiwe ibaraenisepo didoju-ogun ọlọjẹ naa.
Calibrators, Awọn iṣakoso Didara, ati omi ara tabi awọn ayẹwo pilasima ti wa ni idapọ daradara ni ọkọọkan
ifipamọ ti o ni hACE2-HRP conjugate aliquoted ni awọn tubes kekere. Lẹhinna a gbe awọn akojọpọ sinu
awọn kanga microplate ti o ni iṣipopada ajẹkù SARS-CoV-2 RBD aibikita (RBD) fun
abeabo. Lakoko abeabo iṣẹju 30, ajẹsara RBD kan pato ninu awọn calibrators, QC ati
Awọn ayẹwo yoo dije pẹlu hACE2-HRP fun isomọ kan pato ti RBD aibikita ninu awọn kanga. Lẹhin
abeabo, awọn kanga ti wa ni fo 4 igba lati yọ unbound hACE2-HRP conjugate. A ojutu ti
TMB ti wa ni afikun ati idabobo fun iṣẹju 20 ni iwọn otutu yara, ti o mu ki idagbasoke ti a
awọ buluu. Idagbasoke awọ ti duro pẹlu afikun ti 1N HCl, ati gbigba jẹ
won spectrophotometrically ni 450 nm. Awọn kikankikan ti awọn awọ akoso ni iwon si awọn
iye ti henensiamu ti o wa, ati pe o ni ibatan si iye awọn iṣedede ti a ṣe ayẹwo ni ọna kanna.
Nipasẹ lafiwe pẹlu awọn odiwọn ti tẹ akoso nipa awọn calibrators pese, awọn fojusi ti
yokuro awọn aporo inu apẹẹrẹ aimọ lẹhinna ṣe iṣiro.
【Awọn ohun elo ti a beere Sugbon ko pese】
1. Distilled tabi deionized omi
2. Awọn pipette pipe: 10μL, 100μL, 200μL ati 1 mL
3. Awọn imọran pipette isọnu
4. Microplate RSS ti o lagbara ti kika absorbance ni 450nm.
5. Absorbent iwe
6. Iwe aworan
7. Vortex aladapo tabi deede
【Apejuwe Apejuwe ATI Ibi ipamọ】
1. Awọn ayẹwo omi ara ati Plasma ti a gba ni awọn tubes ti o ni K2-EDTA le ṣee lo fun ohun elo yii.
2. Awọn ayẹwo yẹ ki o wa ni capped ati pe o le wa ni ipamọ fun wakati 48 ni 2 °C - 8 °C ṣaaju ṣiṣe ayẹwo.
Awọn apẹẹrẹ ti o waye fun igba pipẹ (to oṣu mẹfa) yẹ ki o wa ni didi ni ẹẹkan ni -20 °C ṣaaju ṣiṣe ayẹwo.
Yago fun tun di-thaw iyika.
Ilana
【Igbaradi Reagent】
1. Gbogbo reagents gbọdọ wa ni ya jade lati refrigeration ati ki o laaye lati pada si yara otutu ṣaaju lilo
(20 ° si 25 ° C). Fi gbogbo awọn reagents pamọ sinu firiji ni kiakia lẹhin lilo.
2. Gbogbo awọn ayẹwo ati awọn iṣakoso yẹ ki o wa ni vortexed ṣaaju lilo.
3. hACE2-HRP Solusan Igbaradi: Dilute hACE2-HRP ifọkansi ni 1: 51 ipin dilution pẹlu Dilution
Ifipamọ. Fun apẹẹrẹ, dilute 100 μL ti ifọkansi hACE2-HRP pẹlu 5.0mL ti Idaduro Dilution HRP si
ṣe ojutu hACE2-HRP.
4. 1× Wẹ Solusan Igbaradi: Dilute the 20× Wash Solution with deionized or distilled water with a
ipin iwọn didun ti 1:19. Fun apẹẹrẹ, dilute 20 milimita ti 20 × Solusan Wẹ pẹlu 380 milimita ti deionized tabi
omi distilled lati ṣe 400 milimita ti 1 × Solusan Wẹ.
【Ilana Igbeyewo】
1. Ni awọn tubes ọtọtọ, aliquot 120μL ti HACE2-HRP Solusan ti a pese sile.
2. Fi 6 μL ti awọn calibrators, awọn ayẹwo aimọ, awọn iṣakoso didara ni tube kọọkan ati ki o dapọ daradara.
3. Gbigbe 100μL ti adalu kọọkan ti a pese sile ni igbesẹ 2 sinu awọn kanga microplate ti o baamu gẹgẹbi
to predesigned igbeyewo iṣeto ni.
3. Bo awo pẹlu Plate Sealer ati incubate ni 37 ° C fun ọgbọn išẹju 30.
4. Yọ Plate Sealer kuro ki o si wẹ awo naa pẹlu iwọn 300 μL ti 1 × Solusan Wẹ fun kanga fun igba mẹrin.
5. Fọwọ ba awo lori aṣọ toweli iwe lati yọ omi to ku ninu awọn kanga lẹhin awọn igbesẹ fifọ.
6. Fi 100 μL ti Solusan TMB si daradara kọọkan ki o si fi awo naa sinu okunkun ni 20 - 25 ° C fun awọn iṣẹju 20.
7. Fi 50 μL ti Solusan Duro si kanga kọọkan lati da iṣesi naa duro.
8. Ka absorbance ni microplate RSS ni 450 nm laarin 10 iṣẹju (630nm bi ẹya ẹrọ jẹ
ṣe iṣeduro fun iṣẹ ṣiṣe ti o ga julọ).