SARS-CoV-2 נעוטראַליזינג אַנטיבאָדי דעטעקשאַן קיט (ELISA)
【פּרינציפּ】
די סאַרס-קאָוו -2 נעוטראַליזינג אַנטיבאָדי דעטעקשאַן קיט איז באזירט אויף קאַמפּעטיטיוו עליסאַ מעטאַדאַלאַדזשי.
ניצן פּיוראַפייד רעסעפּטאָר ביינדינג פעלד (RBD), פּראָטעין פון די וויראַל ספּייק (S) פּראָטעין און דער באַלעבאָס צעל
רעסעפּטאָר ACE2, דעם פּראָבע איז דיזיינד צו נאָכקרימען די ווירוס-באַלעבאָס נוטראַלייזינג ינטעראַקשאַן.
קאַלאַברייטערז, קוואַליטי קאָנטראָלס און סערום אָדער פּלאַזמע סאַמפּאַלז זענען ינדיווידזשואַלי געמישט געזונט אין דיילושאַן
באַפער מיט הACE2-HRP קאָנדזשוגאַטע אַליקוואָטעד אין קליין טובז. דערנאָך די מיקסטשערז זענען טראַנספערד אין
די מיקראָפּלאַטע וועלז מיט ימאָובאַלייזד רעקאָמבינאַנט סאַרס-קאָוו -2 RBD פראַגמענט (RBD) פֿאַר
ינגקיוביישאַן. בעשאַס די ינגקיוביישאַן פון 30 מינוט, די RBD ספּעציפיש אַנטיבאָדי אין די קאַלאַברייטערז, QC און
סאַמפּאַלז וועט קאָנקורירן מיט די hACE2-HRP פֿאַר ספּעציפיש ביינדינג די RBD ימאָובאַלייזד אין די וועלז. נאָך
די ינגקיוביישאַן, די וועלז זענען געוואשן 4 מאל צו באַזייַטיקן אַנבאַונד הACE2-HRP קאָנדזשוגאַטע. א לייזונג פון
טמב איז דעריבער מוסיף און ינקובייטיד פֿאַר 20 מינוט אין צימער טעמפּעראַטור, ריזאַלטינג אין דער אַנטוויקלונג פון אַ
בלוי קאָליר. די קאָליר אַנטוויקלונג איז סטאַפּט מיט די דערצו פון 1N הקל, און די אַבזאָרבאַנס איז
ספּעקטראָפאָטאָמעטריק געמאסטן ביי 450 נם. די ינטענסיטי פון די קאָלירן געשאפן איז פּראַפּאָרשאַנאַל צו די
סומע פון ענזיים פאָרשטעלן, און איז פאַרקערט צו די סומע פון סטאַנדאַרדס אַסיינד אין די זעלבע וועג.
דורך פאַרגלייַך מיט די קאַלאַבריישאַן ויסבייג געשאפן דורך די צוגעשטעלט קאַלאַברייטערז, די קאַנסאַנטריישאַן פון
נוטראַלייזינג אַנטיבאָדיעס אין די אומבאַקאַנט מוסטער איז דעמאָלט קאַלקיאַלייטיד.
【מאַטעריאַלס פארלאנגט אָבער נישט צוגעשטעלט】
1. דיסטילד אָדער דייאָניזעד וואַסער
2. פּרעסיסיאָן פּיפּעטטעס: 10μL, 100μL, 200μL און 1 מל
3. דיספּאָוזאַבאַל פּייפּעט עצות
4. מיקראָפּלאַטע לייענער טויגעוודיק פון לייענען אַבזאָרבאַנס בייַ 450נם.
5. אַבסאָרבאַנט פּאַפּיר
6. גראַפיק פּאַפּיר
7. וואָרטעקס מיקסער אָדער עקוויוואַלענט
【ספּעסימען זאַמלונג און סטאָרידזש】
1. סערום און פּלאַזמע סאַמפּאַלז געזאמלט אין טובז מיט K2-EDTA קענען זיין געוויינט פֿאַר דעם קיט.
2. ספּעסאַמאַנז זאָל זיין קאַפּט און קענען זיין סטאָרד פֿאַר אַרויף צו 48 שעה בייַ 2 °C - 8 °C איידער אַסעיינג.
ספּעסאַמאַנז וואָס זענען געהאלטן פֿאַר אַ מער צייט (אַרויף צו 6 חדשים) זאָל זיין פאַרפרוירן בלויז אַמאָל ביי -20 °C איידער די אַסיינמאַנט.
ויסמיידן ריפּיטיד פרירן-טאָ סייקאַלז.
פּראָטאָקאָל
【רעאַגענט צוגרייטונג】
1. אַלע ריידזשאַנץ מוזן זיין גענומען אויס פון ריפרידזשעריישאַן און ערלויבט צו צוריקקומען צו צימער טעמפּעראַטור איידער נוצן
(20° צו 25°C). היט אַלע ריידזשאַנץ אין פרידזשידער פּונקט נאָך נוצן.
2. אַלע סאַמפּאַלז און קאָנטראָלס זאָל זיין וואָרטעקסעד איידער נוצן.
3. הACE2-HRP לייזונג צוגרייטונג: צעפירן הACE2-HRP קאַנסאַנטרייט אין 1:51 דיילושאַן פאַרהעלטעניש מיט דילוטיאָן
באַפער. למשל, צעפירן 100 μל HACE2-HRP קאַנסאַנטרייט מיט 5.0 מל HRP דילוטיאָן באַפער צו
מאַכן אַ hACE2-HRP לייזונג.
4. 1 × וואַש לייזונג צוגרייטונג: צעפירן די 20 × וואַש סאַלושאַן מיט דייאַנייזד אָדער דיסטילד וואַסער מיט אַ
באַנד פאַרהעלטעניש פון 1:19. פֿאַר בייַשפּיל, צעפירן 20 מל פון 20 × וואַש לייזונג מיט 380 מל פון דעיאָניזעד אָדער
דיסטילד וואַסער צו מאַכן 400 מל פון 1 × וואַש לייזונג.
【טעסט פּראָצעדור】
1. אין באַזונדער טובז, aliquot 120μL פון די צוגעגרייט הACE2-HRP לייזונג.
2. לייג 6 μ ל קאַלאַברייטערז, אומבאַקאַנט סאַמפּאַלז, קוואַליטעט קאָנטראָלס אין יעדער רער און מישן געזונט.
3. אַריבערפירן 100μ ל פון יעדער געמיש צוגעגרייט אין די שריט 2 אין קאָראַספּאַנדינג מיקראָפּלאַטע וועלז לויט
צו פּרידיזיינד פּרובירן קאַנפיגיעריישאַן.
3. קאָווער די טעלער מיט פּלאַטע סעאַלער און ינקובייט בייַ 37 ° C פֿאַר 30 מינוט.
4. אַראָפּנעמען די פּלאַטע סעאַלער און וואַשן די טעלער מיט בעערעך 300 μ ל פון 1 × וואַש סאַלושאַן פּער געזונט פֿאַר פיר מאָל.
5. צאַפּן די טעלער אויף פּאַפּיר האַנטעך צו באַזייַטיקן ריזידזשואַל פליסיק אין די וועלז נאָך וואַשינג סטעפּס.
6. לייג 100 μL פון TMB לייזונג צו יעדער געזונט און ינקובייט די טעלער אין טונקל בייַ 20 - 25 ° C פֿאַר 20 מינוט.
7. לייג 50 μל סטאָפּ לייזונג צו יעדער געזונט צו האַלטן די אָפּרוף.
8. לייענען די אַבזאָרפּשאַן אין מיקראָפּלאַטע לייענער ביי 450 נם ין 10 מינוט (630nm ווי אַקסעסערי איז
רעקאַמענדיד פֿאַר העכער פּינטלעכקייַט פאָרשטעלונג).