Bộ phát hiện kháng thể trung hòa SARS-CoV-2 （ELISA)

【MỤC ĐÍCH SỬ DỤNG】

Bộ phát hiện kháng thể trung hòa SARS-CoV-2 là Xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzyme (ELISA) cạnh tranh nhằm phát hiện định tính và bán định lượng tổng số kháng thể trung hòa với SARS-CoV-2 trong huyết thanh và huyết tương người. Bộ phát hiện kháng thể trung hòa SARS-CoV-2 có thể được sử dụng như một công cụ hỗ trợ xác định những cá nhân có phản ứng miễn dịch thích ứng với SARS-CoV-2, cho biết tình trạng nhiễm trùng gần đây hoặc trước đó. Không nên sử dụng Bộ phát hiện kháng thể trung hòa SARS-CoV-2 để chẩn đoán nhiễm SARS-CoV-2 cấp tính.

【GIỚI THIỆU】

Nhiễm trùng coronavirus thường gây ra phản ứng kháng thể trung hòa. Tỷ lệ chuyển đổi huyết thanh ở bệnh nhân COVID-19 lần lượt là 50% và 100% vào ngày thứ 7 và 14 sau khi khởi phát triệu chứng. Để trình bày kiến ​​thức, kháng thể trung hòa vi rút tương ứng trong máu được công nhận là mục tiêu để xác định hiệu quả của kháng thể và nồng độ kháng thể trung hòa cao hơn cho thấy hiệu quả bảo vệ cao hơn. Thử nghiệm trung hòa giảm mảng bám (PRNT) đã được công nhận là tiêu chuẩn vàng để phát hiện các kháng thể trung hòa. Tuy nhiên, do năng suất thấp và yêu cầu vận hành cao hơn, PRNT không thực tế để chẩn đoán huyết thanh và đánh giá vắc xin trên quy mô lớn. Bộ phát hiện kháng thể trung hòa SARS-CoV-2 dựa trên phương pháp Xét nghiệm miễn dịch hấp thụ liên kết với enzyme (ELISA) cạnh tranh, có thể phát hiện kháng thể trung hòa trong mẫu máu cũng như truy cập đặc biệt vào mức nồng độ của loại kháng thể này.

 【Quy trình kiểm tra】

1. Trong các ống riêng biệt, lấy 120μL dung dịch hACE2-HRP đã chuẩn bị.

2.Thêm 6 μL chất hiệu chuẩn, mẫu chưa biết, chất kiểm soát chất lượng vào mỗi ống và trộn đều.

3. Chuyển 100μL mỗi hỗn hợp được chuẩn bị ở bước 2 vào các giếng vi đĩa tương ứng theo cấu hình thử nghiệm được thiết kế trước.

3. Đậy đĩa bằng Plate Sealer và ủ ở 37°C trong 60 phút.

4.Tháo tấm bịt ​​kín và rửa đĩa bằng khoảng 300 μL dung dịch rửa 1× mỗi giếng trong bốn lần.

5. Đập đĩa lên khăn giấy để loại bỏ chất lỏng còn sót lại trong giếng sau các bước rửa.

6. Thêm 100 µL dung dịch TMB vào mỗi giếng và ủ đĩa ở nơi tối ở 20 – 25°C trong 20 phút.

7. Thêm 50 µL dung dịch dừng vào mỗi giếng để dừng phản ứng.

8.Đọc độ hấp thụ trong đầu đọc vi bản ở bước sóng 450 nm trong vòng 10 phút (nên dùng phụ kiện 630nm để có hiệu suất chính xác cao hơn.