SARS-CoV-2 neytrallashtiruvchi antikorlarni aniqlash to'plami (ELISA)
【MAQSADDA FOYDALANISH】
SARS-CoV-2 neytrallashtiruvchi antikorlarni aniqlash to'plami bu raqobatbardosh ferment bilan bog'langan immunosorbent tahlili (ELISA) bo'lib, inson zardobida va plazmasida SARS-CoV-2 ga to'liq neytrallashtiruvchi antikorlarni sifatli va yarim miqdoriy jihatdan aniqlash uchun mo'ljallangan. SARS-CoV-2 neytrallashtiruvchi antikorlarni aniqlash to'plami SARS-CoV-2 ga moslashgan immun javobga ega bo'lgan shaxslarni aniqlashda yordam sifatida ishlatilishi mumkin, bu yaqinda yoki oldingi infektsiyani ko'rsatadi. SARS-CoV-2 neytrallashtiruvchi antikorlarni aniqlash to'plami o'tkir SARS-CoV-2 infektsiyasini tashxislash uchun ishlatilmasligi kerak.
【KIRISH】
Koronavirus infektsiyalari odatda neytrallashtiruvchi antikor reaktsiyalarini keltirib chiqaradi. COVID-19 bilan kasallangan bemorlarda serokonversiya darajasi simptom boshlanganidan keyin 7 va 14-kunlarda mos ravishda 50% va 100% ni tashkil qiladi. Ma'lumotlarga ko'ra, qondagi tegishli virusni zararsizlantiradigan antikor antikor samaradorligini aniqlash uchun maqsad sifatida tan olingan va neytrallashtiruvchi antikorning yuqori konsentratsiyasi yuqori himoya samaradorligini ko'rsatadi. Blyashka kamaytirish neytrallash testi (PRNT) neytrallashtiruvchi antikorlarni aniqlash uchun oltin standart sifatida tan olingan. Biroq, past o'tkazuvchanligi va ishlash uchun yuqori talab tufayli, PRNT keng miqyosli serodiagnoz va vaktsinani baholash uchun amaliy emas. SARS-CoV-2 neytrallashtiruvchi antikorlarni aniqlash to'plami raqobatbardosh ferment bilan bog'langan immunosorbent tahlili (ELISA) metodologiyasiga asoslangan bo'lib, u qon namunasida neytrallashtiruvchi antikorni aniqlay oladi, shuningdek, ushbu turdagi antikorlarning kontsentratsiyasi darajasiga maxsus kira oladi.
【Sinov tartibi】
1.Alohida naychalarda, 120 mkl tayyorlangan hACE2-HRP eritmasidan alikot.
2.Har bir naychaga 6 mkL kalibratorlar, nomaʼlum namunalar, sifat nazorati qoʻshing va yaxshilab aralashtiring.
3. 2-bosqichda tayyorlangan har bir aralashmaning 100 mkl ni oldindan ishlab chiqilgan sinov konfiguratsiyasiga muvofiq mos keladigan mikroplastinka quduqlariga o'tkazing.
3.Plastinkani plastinka yopishtiruvchi bilan yoping va 37°C da 60 daqiqa davomida inkubatsiya qiling.
4. Plitalar yopishtirgichni olib tashlang va plastinkani har bir quduqqa taxminan 300 mL 1× yuvish eritmasi bilan to'rt marta yuving.
5. Yuvish bosqichlaridan so'ng quduqlardagi qoldiq suyuqlikni olib tashlash uchun qog'oz sochiq ustiga plastinkaga teging.
6.Har bir quduqqa 100 mkL TMB eritmasi qo'shing va plastinkani qorong'i joyda 20-25°C da 20 daqiqa davomida inkubatsiya qiling.
7.Reaksiyani to'xtatish uchun har bir quduqqa 50 mL to'xtatuvchi eritma qo'shing.
8. 10 daqiqa ichida 450 nm chastotada mikroplata o'quvchida absorbansni o'qing (yuqori aniqlik uchun qo'shimcha qurilma sifatida 630 nm tavsiya etiladi.
