SARS-CoV-2 نیوٹرلائزنگ اینٹی باڈی ڈیٹیکشن کٹ (ELISA)

【مطلوبہ استعمال】

SARS-CoV-2 نیوٹرلائزنگ اینٹی باڈی ڈیٹیکشن کٹ ایک مسابقتی انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ (ELISA) ہے جس کا مقصد انسانی سیرم اور پلازما میں SARS-CoV-2 کو غیر جانبدار کرنے والے اینٹی باڈیز کی کوالٹیٹو اور نیم مقداری پتہ لگانے کے لیے ہے۔ SARS- CoV-2 نیوٹرلائزنگ اینٹی باڈی ڈیٹیکشن کٹ کو ایسے افراد کی شناخت میں مدد کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے جو SARS- CoV-2 کے لیے مدافعتی ردعمل کے حامل ہیں، جو حالیہ یا پہلے کے انفیکشن کی نشاندہی کرتے ہیں۔ SARS-CoV-2 نیوٹرلائزنگ اینٹی باڈی ڈیٹیکشن کٹ کو شدید SARS-CoV-2 انفیکشن کی تشخیص کے لیے استعمال نہیں کیا جانا چاہیے۔

【تعارف】

کورونا وائرس کے انفیکشن عام طور پر اینٹی باڈی کے ردعمل کو بے اثر کرتے ہیں۔ COVID-19 کے مریضوں میں سیرو کنورژن کی شرح 7 ویں اور 14 ویں دن علامات کے آغاز کے بعد بالترتیب 50% اور 100% ہے۔ علم کو پیش کرنے کے لیے، خون میں وائرس کو بے اثر کرنے والے اینٹی باڈی کو اینٹی باڈی کی افادیت کا تعین کرنے کے لیے ایک ہدف کے طور پر تسلیم کیا جاتا ہے اور نیوٹرلائزنگ اینٹی باڈی کا زیادہ ارتکاز تحفظ کی اعلی افادیت کی نشاندہی کرتا ہے۔ پلاک ریڈکشن نیوٹرلائزیشن ٹیسٹ (PRNT) کو نیوٹرلائزنگ اینٹی باڈیز کا پتہ لگانے کے لیے سونے کے معیار کے طور پر تسلیم کیا جاتا رہا ہے۔ تاہم، اس کے کم تھرو پٹ اور آپریشن کے لیے زیادہ ضرورت کی وجہ سے، PRNT بڑے پیمانے پر سیرو تشخیص اور ویکسین کی تشخیص کے لیے عملی نہیں ہے۔ SARS-CoV-2 نیوٹرلائزنگ اینٹی باڈی ڈیٹیکشن کٹ مسابقتی انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ اسے (ELISA) کے طریقہ کار پر مبنی ہے، جو خون کے نمونے میں نیوٹرلائزنگ اینٹی باڈی کا پتہ لگانے کے ساتھ ساتھ خاص طور پر اس قسم کے اینٹی باڈی کے ارتکاز کی سطح تک رسائی حاصل کر سکتی ہے۔

 【ٹیسٹ کا طریقہ کار】

1. علیحدہ ٹیوبوں میں، تیار کردہ hACE2-HRP محلول کا ایلی کوٹ 120μL۔

2. ہر ٹیوب میں 6 μL کیلیبریٹر، نامعلوم نمونے، کوالٹی کنٹرولز شامل کریں اور اچھی طرح مکس کریں۔

3۔مرحلہ 2 میں تیار کردہ ہر مکسچر کا 100μL پہلے سے ڈیزائن کردہ ٹیسٹ کنفیگریشن کے مطابق متعلقہ مائیکرو پلیٹ کنوؤں میں منتقل کریں۔

3. پلیٹ کو پلیٹ سیلر سے ڈھانپیں اور 37 ° C پر 60 منٹ تک انکیوبیٹ کریں۔

4. پلیٹ سیلر کو ہٹائیں اور پلیٹ کو تقریباً 300 μL 1× واش سلوشن فی کنویں کے ساتھ چار بار دھو لیں۔

5۔کاغذ کے تولیے پر پلیٹ کو تھپتھپائیں تاکہ قدموں کو دھونے کے بعد کنوؤں میں موجود بقایا مائع کو ہٹایا جا سکے۔

6. ہر کنویں میں 100 μL TMB محلول شامل کریں اور پلیٹ کو اندھیرے میں 20 - 25 ° C پر 20 منٹ تک سینکیں۔

7. رد عمل کو روکنے کے لیے ہر کنویں میں 50 μL سٹاپ سلوشن شامل کریں۔

مائکروپلیٹ ریڈر میں جاذبیت کو 10 منٹ کے اندر 450 nm پر پڑھیں (اعلیٰ درست کارکردگی کے لیے بطور لوازمات 630nm تجویز کیا جاتا ہے۔