Набір для виявлення нейтралізуючих антитіл SARS-CoV-2 (ELISA)

Короткий опис:


Деталі продукту

Теги товарів

ПРИНЦИП

Набір для виявлення нейтралізуючих антитіл SARS-CoV-2 заснований на конкурентоспроможній методології ELISA.

Використовуючи очищений домен зв’язування рецептора (RBD), білок з білка вірусного шипа (S) і клітини-господаря

рецептора ACE2, цей тест призначений для імітації нейтралізуючої взаємодії вірус-господар.

Калібратори, засоби контролю якості та зразки сироватки або плазми окремо добре змішуються в розведенні

буфер, що містить кон’югат hACE2-HRP, аліквотований у невеликих пробірках. Потім суміші перекладаються

лунки мікропланшета, що містять іммобілізований рекомбінантний SARS-CoV-2 фрагмент RBD (RBD) для

інкубація. Під час 30-хвилинної інкубації RBD специфічне антитіло в калібраторах, КЯ та

зразки будуть конкурувати з hACE2-HRP за специфічне зв’язування RBD, іммобілізованого в лунках. Після

Після інкубації лунки промивають 4 рази для видалення незв’язаного кон’югату hACE2-HRP. Розчин

Потім додають TMB та інкубують протягом 20 хвилин при кімнатній температурі, що призводить до розвитку a

синій колір. Розвиток забарвлення припиняється додаванням 1 н. HCl, а поглинання зникає

виміряно спектрофотометрично при 450 нм. Інтенсивність утвореного кольору пропорційна

кількість присутнього ферменту та обернено пропорційна кількості стандартів, аналізованих таким же чином.

Через порівняння з калібрувальною кривою, сформованою наданими калібраторами, концентрація

потім обчислюють нейтралізуючі антитіла в невідомому зразку.

1
2

МАТЕРІАЛИ НЕОБХІДНІ, АЛЕ НЕ НАДАЮТЬСЯ

1. Дистильована або деіонізована вода

2. Точні піпетки: 10 мкл, 100 мкл, 200 мкл і 1 мл

3. Одноразові наконечники для піпеток

4. Зчитувач мікропланшетів, здатний зчитувати абсорбцію при 450 нм.

5. Вбираючий папір

6. Міліметровий папір

7. Вихровий змішувач або еквівалент

ЗБІР І ЗБЕРІГАННЯ ЗРАЗКІВ

1. Для цього набору можна використовувати зразки сироватки та плазми, зібрані в пробірки, що містять K2-EDTA.

2. Зразки повинні бути закриті кришкою та зберігатися протягом 48 годин при температурі 2 °C - 8 °C перед аналізом.

Зразки, які зберігаються протягом тривалого часу (до 6 місяців), слід заморозити лише один раз при -20 °C перед аналізом.

Уникайте повторних циклів заморожування-розморожування.

ПРОТОКОЛ

3

Приготування реагентів

1. Усі реагенти необхідно вийняти з холодильника та дати їм повернутися до кімнатної температури перед використанням

(від 20° до 25°C). Зберігайте всі реагенти в холодильнику одразу після використання.

2. Усі зразки та контролі слід перемішати перед використанням.

3. Приготування розчину hACE2-HRP: розведіть концентрат hACE2-HRP у співвідношенні розведення 1:51 за допомогою Dilution

Буфер. Наприклад, розведіть 100 мкл концентрату hACE2-HRP 5,0 мл буфера для розведення HRP, щоб

зробити розчин hACE2-HRP.

4. Приготування 1× промивного розчину: розведіть 20× промивний розчин деіонізованою або дистильованою водою за допомогою

об'ємне співвідношення 1:19. Наприклад, розведіть 20 мл розчину для промивання 20 × 380 мл деіонізованого або

дистильованої води, щоб отримати 400 мл 1× промивного розчину.

Процедура тестування

1. В окремі пробірки розмістіть 120 мкл готового розчину hACE2-HRP.

2. Додайте 6 мкл калібраторів, невідомих зразків, контролю якості в кожну пробірку та добре перемішайте.

3. Перенесіть 100 мкл кожної суміші, приготовленої на кроці 2, у відповідні лунки мікропланшета відповідно до

до попередньо розробленої тестової конфігурації.

3. Накрийте планшет Plate Sealer та інкубуйте при 37°C протягом 30 хвилин.

4. Зніміть ущільнювач планшета та промийте планшет приблизно 300 мкл 1× промивного розчину на лунку чотири рази.

5. Постукайте планшетом по паперовому рушнику, щоб видалити залишки рідини в лунках після етапів промивання.

6. Додайте 100 мкл розчину ТМВ до кожної лунки та інкубуйте планшет у темряві при 20–25°C протягом 20 хвилин.

7. Додайте 50 мкл стоп-розчину в кожну лунку, щоб зупинити реакцію.

8. Прочитайте поглинання в рідері мікропланшетів при 450 нм протягом 10 хвилин (630 нм як аксесуар

рекомендовано для більшої точності).

Надішліть нам своє повідомлення:

Надішліть нам своє повідомлення:

Напишіть своє повідомлення тут і надішліть його нам