Набір для виявлення нейтралізуючих антитіл SARS-CoV-2 (ІФА)
【ВИКОРИСТАННЯ ЗА ПРИЗНАЧЕННЯМ】
SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit — це конкурентний імуноферментний аналіз (ELISA), призначений для якісного та напівкількісного виявлення загальних нейтралізуючих антитіл до SARS-CoV-2 у сироватці та плазмі крові людини. Набір для виявлення нейтралізуючих антитіл до SARS-CoV-2 можна використовувати як допоміжний засіб для ідентифікації осіб з адаптивною імунною відповіддю на SARS-CoV-2, що вказує на недавню або попередню інфекцію. Набір нейтралізуючих антитіл до SARS-CoV-2 не слід використовувати для діагностики гострої інфекції SARS-CoV-2.
【ВСТУП】
Коронавірусні інфекції зазвичай викликають реакції нейтралізуючих антитіл. Рівень сероконверсії у пацієнтів з COVID-19 становить 50% і 100% на 7 і 14 день після появи симптомів відповідно. Згідно з наявними знаннями, відповідне нейтралізуюче вірус антитіло в крові визнано мішенню для визначення ефективності антитіла, а більш висока концентрація нейтралізуючого антитіла вказує на більш високу ефективність захисту. Тест нейтралізації зменшення зубного нальоту (PRNT) був визнаний золотим стандартом для виявлення нейтралізуючих антитіл. Однак через низьку пропускну здатність і вищі вимоги до роботи PRNT не є практичним для широкомасштабної серодіагностики та оцінки вакцини. Набір для виявлення нейтралізуючих антитіл SARS-CoV-2 заснований на методології конкурентного імуноферментного аналізу (ELISA), який може виявити нейтралізуючі антитіла в зразку крові, а також отримати спеціальний доступ до рівнів концентрації цього типу антитіл.
【Процедура тестування】
1. В окремі пробірки розмістіть 120 мкл готового розчину hACE2-HRP.
2. Додайте 6 мкл калібраторів, невідомих зразків, контролю якості в кожну пробірку та добре перемішайте.
3. Перенесіть 100 мкл кожної суміші, приготовленої на кроці 2, у відповідні лунки мікропланшета відповідно до попередньо розробленої тестової конфігурації.
3. Накрийте планшет Plate Sealer та інкубуйте при 37°C протягом 60 хвилин.
4. Зніміть ущільнювач планшета та промийте планшет приблизно 300 мкл 1× промивного розчину на лунку чотири рази.
5. Постукайте планшетом по паперовому рушнику, щоб видалити залишки рідини в лунках після етапів промивання.
6. Додайте 100 мкл розчину ТМВ до кожної лунки та інкубуйте планшет у темряві при 20–25°C протягом 20 хвилин.
7. Додайте 50 мкл стоп-розчину в кожну лунку, щоб зупинити реакцію.
8. Зчитайте поглинання за допомогою пристрою для зчитування мікропланшетів при 450 нм протягом 10 хвилин (630 нм як допоміжне обладнання рекомендовано для більш високої точності).
