SARS-CoV-2 نېيتراللاشتۇرغۇچى ئانتىتېلا بايقاش زاپچىسى (ELISA)
【PRINCIPLE】
SARS-CoV-2 نېيتراللاشتۇرغۇچى ئانتىتېلا بايقاش ئەسۋابى رىقابەت كۈچىگە ئىگە ELISA ئۇسۇلىنى ئاساس قىلغان.
ساپلاشتۇرۇلغان قوبۇللىغۇچ باغلاش دائىرىسى (RBD) ، ۋىرۇس تاياقچىسى (S) ئاقسىلى ۋە ساھىبجامال ھۈجەيرىسىدىكى ئاقسىل
قوبۇللىغۇچ ACE2 ، بۇ سىناق ۋىرۇس ساھىبىنىڭ نېيتراللاشتۇرۇشىنى تەقلىد قىلىش ئۈچۈن لايىھەلەنگەن.
تەڭشىگۈچ ، سۈپەت كونتروللۇقى ۋە قان زەردابى ياكى پلازما ئەۋرىشكىسى ئايرىم-ئايرىم ئارىلاشتۇرۇلىدۇ
كىچىك تۇرۇبىلاردا تەقلىد قىلىنغان HACE2-HRP ئۇلىغۇچ بار بۇففېر.ئاندىن ئارىلاشمىلار يۆتكىلىدۇ
مىكرو تىپلىق قۇدۇقلار ھەرىكەتلەندۈرۈلگەن قايتا ھاسىل بولىدىغان SARS-CoV-2 RBD پارچىسى (RBD) نى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.
incubation.30 مىنۇتلۇق يوشۇرۇن ھالەتتە ، تەڭشىگۈچتىكى RBD ئالاھىدە ئانتىتېلا ، QC ۋە
ئەۋرىشكە قۇدۇقلاردا ھەرىكەتلەنمەيدىغان RBD نى ئالاھىدە باغلاش ئۈچۈن HACE2-HRP بىلەن رىقابەتلىشىدۇ.After
يوشۇرۇن ھالەتتە ، قۇدۇقلار 4 قېتىم يۇيۇلۇپ ، باغلانمىغان HACE2-HRP ئۇلىغۇچنى ئېلىۋېتىدۇ.ھەل قىلىش چارىسى
ئاندىن TMB قوشۇلۇپ ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا 20 مىنۇت سىڭدۈرۈلۈپ ، ئا تەرەققىي قىلىدۇ
كۆك رەڭ.1N HCl نىڭ قوشۇلۇشى بىلەن رەڭ ئېچىش توختىتىلىدۇ ، سۈمۈرۈلۈش
سپېكترو فوتومېتىرلىق ئۆلچەش ئارقىلىق 450 nm.شەكىللەنگەن رەڭنىڭ كۈچلۈكلۈك دەرىجىسى بىلەن ماس كېلىدۇ
ھازىر بار بولغان ئېنزىمنىڭ مىقدارى ، ئوخشاش ئۇسۇلدا ئۆلچەم قىلىنغان ئۆلچەم بىلەن تەتۈر تاناسىپ بولىدۇ.
تەمىنلەنگەن تەڭشىگۈچ ئارقىلىق شەكىللەنگەن تەۋرىنىش ئەگرى سىزىقى بىلەن سېلىشتۇرۇش ئارقىلىق ، قويۇقلۇقى
نامەلۇم ئەۋرىشكىدىكى ئانتىتېلانى نېيتراللاش ئاندىن ھېسابلىنىدۇ.
【ماتېرىياللار تەلەپ قىلىندى ، ئەمما تەمىنلەنمىدى】
1. دىرىللانغان ياكى دىئونلانغان سۇ
2. ئېنىق تۇرۇبا: 10μL ، 100μL ، 200μL ۋە 1 mL
3. بىر قېتىم ئىشلىتىلىدىغان تۇرۇبا ئۇسۇللىرى
4. مىكرو تىپلىق ئوقۇرمەننىڭ قوبۇل قىلىش ئىقتىدارى 450nm.
5. سۈمۈرۈلمىگەن قەغەز
6. گرافىك قەغەز
7. Vortex ئارىلاشتۇرغۇچ ياكى ئۇنىڭغا باراۋەر
【ئالاھىدە يىغىش ۋە ساقلاش】
1. بۇ يۈرۈشلۈك زاپچاسلارغا K2-EDTA بولغان تۇرۇبىلارغا يىغىلغان قان زەردابى ۋە پلازما ئەۋرىشكىسىنى ئىشلىتىشكە بولىدۇ.
2. ئەۋرىشكەلەرنى چەكلەش كېرەك ، تەكشۈرۈشتىن ئىلگىرى 2 سېلسىيە گرادۇس - 8 سېلسىيە گرادۇسقىچە 48 سائەت ساقلاشقا بولىدۇ.
ئۇزۇنراق (6 ئايغىچە) ساقلانغان ئەۋرىشكەلەر تەكشۈرۈشتىن ئىلگىرى -20 سېلسىيە گرادۇستا بىر قېتىم توڭلىتىلىشى كېرەك.
قايتا-قايتا مۇزلاش دەۋرىدىن ساقلىنىڭ.
PROTOCOL
【Reagent Preparation】
1. بارلىق رېئاكتورلار توڭلاتقۇدىن چىقىرىلىپ ، ئىشلىتىشتىن بۇرۇن ئۆينىڭ تېمپېراتۇرىسىغا قايتىشى كېرەك
(20 ° C25 ° C).بارلىق رېئاكتورلارنى توڭلاتقۇدا ئىشلىتىپ بولغاندىن كېيىن دەرھال ساقلاڭ.
2. بارلىق ئەۋرىشكە ۋە كونتروللارنى ئىشلىتىشتىن بۇرۇن قاينىتىش كېرەك.
3. HACE2-HRP ھەل قىلىش تەييارلىقى: سۇيۇق ھالەتتىكى HACE2-HRP قويۇقلۇقى 1: 51 لىك سۇيۇلۇش نىسبىتىدە.
Buffer.مەسىلەن ، 100 μL لىق HACE2-HRP قويۇقلۇقى 5.0mL لىق HRP سۇيۇقلۇقى بۇففېرغا سۇيۇلدۇرۇڭ.
HACE2-HRP ھەل قىلىش چارىسى.
4. 1 × يۇيۇش ھەل قىلىش تەييارلىقى: 20 × يۇيۇش ئېرىتمىسىنى دىئونسىزلانغان ياكى ئارىلاشتۇرۇلغان سۇ بىلەن سۇيۇلدۇرۇڭ.
ئاۋاز نىسبىتى 1:19.مەسىلەن ، 20 مىللىلىتىر 20 × يۇيۇش سۇيۇقلۇقى 380 مىللىلىتىرلىق سۇيۇقلاندۇرۇلغان ياكى
دىرىللانغان سۇ 400 مىللىمېتىردىن 1 × يۇيۇش ئېرىتمىسى ھاسىل قىلىدۇ.
【سىناق تەرتىپى】
1. ئايرىم تۇرۇبىلاردا ، تەييارلانغان HACE2-HRP ھەل قىلىش چارىسىنىڭ 120μL لىك ئالكوتى.
2. ھەر بىر تۇرۇبىغا 6 μL لىق تەڭشىگۈچ ، نامەلۇم ئەۋرىشكە ، سۈپەت كونتروللىرىنى قوشۇپ ياخشى ئارىلاشتۇرۇڭ.
3. 2-قەدەمدە تەييارلانغان ھەر بىر ئارىلاشما ماددىنىڭ 100μL ماس ھالدا ماس كېلىدىغان مىكرو قۇدۇققا يۆتكەڭ
ئالدىن سىناق قىلىنغان سەپلىمىگە.
3. تەخسىنى پېچەتلىگۈچ بىلەن يېپىپ ، ° C 37 قا 30 مىنۇت تۇرغۇزۇڭ.
4. تەخسە پېچەتلىگۈچىنى ئېلىۋېتىڭ ھەمدە تەخسىنى تەخمىنەن 300 μL لىك 1 × يۇيۇش ئېرىتمىسى بىلەن تۆت قېتىم يۇيۇڭ.
5. قەغەز لۆڭگە تاختىنى چېكىپ ، يۇيۇپ بولغاندىن كېيىن قۇدۇقتىكى قالدۇق سۇيۇقلۇقنى ئېلىڭ.
6. ھەر بىر قۇدۇققا 100 μL TMB Solution نى قوشۇپ ، تاختاينى 20 - 25 سېلسىيە گرادۇسقىچە 20 مىنۇت تۇرغۇزۇڭ.
7. ھەر بىر قۇدۇققا 50 μL Stop Solution نى قوشۇپ رېئاكسىيەنى توختىتىڭ.
8. 10 مىنۇت ئىچىدە (قوشۇمچە زاپچاس بولغىنىدەك 630nm) مىكرو دولقۇنلۇق ئوقۇغۇچنىڭ سۈمۈرۈلۈشىنى 450 nm دىن ئوقۇڭ
تېخىمۇ ئېنىق بولغان ئىقتىدارغا تەۋسىيە قىلىنىدۇ).
