SARS-CoV-2 نېيتراللاشتۇرغۇچى ئانتىتېلا بايقاش زاپچىسى (ELISA)
【PRINCIPLE】
SARS-CoV-2 نېيتراللاشتۇرغۇچى ئانتىتېلا بايقاش ئەسۋابى رىقابەت كۈچىگە ئىگە ELISA ئۇسۇلىنى ئاساس قىلغان.
ساپلاشتۇرۇلغان قوبۇللىغۇچ باغلاش دائىرىسى (RBD) ، ۋىرۇس تاياقچىسى (S) ئاقسىلى ۋە ساھىبجامال ھۈجەيرىسىدىكى ئاقسىل
قوبۇللىغۇچ ACE2 ، بۇ سىناق ۋىرۇس ساھىبىنىڭ نېيتراللاشتۇرۇشىنى تەقلىد قىلىش ئۈچۈن لايىھەلەنگەن.
تەڭشىگۈچ ، سۈپەت كونتروللۇقى ۋە قان زەردابى ياكى پلازما ئەۋرىشكىسى ئايرىم-ئايرىم ئارىلاشتۇرۇلىدۇ
كىچىك تۇرۇبىلاردا تەقلىد قىلىنغان HACE2-HRP ئۇلىغۇچ بار بۇففېر. ئاندىن ئارىلاشمىلار يۆتكىلىدۇ
مىكرو تىپلىق قۇدۇقلار ھەرىكەتلەندۈرۈلگەن قايتا ھاسىل بولىدىغان SARS-CoV-2 RBD پارچىسى (RBD) نى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.
incubation. 30 مىنۇتلۇق يوشۇرۇن ھالەتتە ، تەڭشىگۈچتىكى RBD ئالاھىدە ئانتىتېلا ، QC ۋە
ئەۋرىشكە قۇدۇقلاردا ھەرىكەتلەنمەيدىغان RBD نى ئالاھىدە باغلاش ئۈچۈن HACE2-HRP بىلەن رىقابەتلىشىدۇ. After
يوشۇرۇن ھالەتتە ، قۇدۇقلار 4 قېتىم يۇيۇلۇپ ، باغلانمىغان HACE2-HRP ئۇلىغۇچنى ئېلىۋېتىدۇ. ھەل قىلىش چارىسى
ئاندىن TMB قوشۇلۇپ ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا 20 مىنۇت سىڭدۈرۈلۈپ ، ئا تەرەققىي قىلىدۇ
كۆك رەڭ. 1N HCl نىڭ قوشۇلۇشى بىلەن رەڭ ئېچىش توختىتىلىدۇ ، سۈمۈرۈلۈش
سپېكترو فوتومېتىرلىق ئۆلچەش ئارقىلىق 450 nm. شەكىللەنگەن رەڭنىڭ كۈچلۈكلۈك دەرىجىسى بىلەن ماس كېلىدۇ
ھازىر بار بولغان ئېنزىمنىڭ مىقدارى ، ئوخشاش ئۇسۇلدا ئۆلچەم قىلىنغان ئۆلچەم بىلەن تەتۈر تاناسىپ بولىدۇ.
تەمىنلەنگەن تەڭشىگۈچ ئارقىلىق شەكىللەنگەن تەۋرىنىش ئەگرى سىزىقى بىلەن سېلىشتۇرۇش ئارقىلىق ، قويۇقلۇقى
نامەلۇم ئەۋرىشكىدىكى ئانتىتېلانى نېيتراللاش ئاندىن ھېسابلىنىدۇ.
【ماتېرىياللار تەلەپ قىلىندى ، ئەمما تەمىنلەنمىدى】
1. دىرىللانغان ياكى دىئونسىزلانغان سۇ
2. ئېنىق تۇرۇبا: 10μL ، 100μL ، 200μL ۋە 1 mL
3. بىر قېتىم ئىشلىتىلىدىغان تۇرۇبا ئۇسۇللىرى
4. مىكرو تىپلىق ئوقۇرمەننىڭ قوبۇل قىلىش ئىقتىدارى 450nm.
5. قەغەز قەغەز
6. گرافىك قەغەز
7. Vortex ئارىلاشتۇرغۇچ ياكى ئۇنىڭغا تەڭ
【ئالاھىدە يىغىش ۋە ساقلاش】
1. K2-EDTA بولغان تۇرۇبىلارغا يىغىلغان قان زەردابى ۋە پلازما ئەۋرىشكىسىنى بۇ زاپچاسقا ئىشلىتىشكە بولىدۇ.
2. ئەۋرىشكە ئېلىش كېرەك ، تەكشۈرۈشتىن ئىلگىرى 2 سېلسىيە گرادۇس - 8 سېلسىيە گرادۇسقىچە 48 سائەت ساقلاشقا بولىدۇ.
ئۇزۇنراق (6 ئايغىچە) ساقلانغان ئەۋرىشكەلەر تەكشۈرۈشتىن ئىلگىرى -20 سېلسىيە گرادۇستا بىر قېتىم توڭلىتىلىشى كېرەك.
قايتا-قايتا مۇزلاش دەۋرىدىن ساقلىنىڭ.
PROTOCOL
【Reagent Preparation】
1. بارلىق رېئاكتورلارنى توڭلاتقۇدىن چىقىرىپ ، ئىشلىتىشتىن بۇرۇن ئۆينىڭ تېمپېراتۇرىسىغا قايتىشقا رۇخسەت قىلىش كېرەك
(20 ° C25 ° C). بارلىق رېئاكتورلارنى توڭلاتقۇدا ئىشلىتىپ بولغاندىن كېيىن دەرھال ساقلاڭ.
2. بارلىق ئەۋرىشكە ۋە كونتروللارنى ئىشلىتىشتىن بۇرۇن قاينىتىش كېرەك.
3.
Buffer. مەسىلەن ، 100 μL لىق HACE2-HRP قويۇقلۇقى 5.0mL لىق HRP سۇيۇقلۇقى بۇففېرغا سۇيۇلدۇرۇڭ.
HACE2-HRP ھەل قىلىش چارىسى.
4. × يۇيۇش ھەل قىلىش تەييارلىقى: 20 × يۇيۇش ئېرىتمىسىنى دىئونسىزلانغان ياكى ئارىلاشتۇرۇلغان سۇ بىلەن سۇيۇلدۇرۇڭ.
ئاۋاز نىسبىتى 1:19. مەسىلەن ، 20 مىللىلىتىر 20 × يۇيۇش سۇيۇقلۇقى 380 مىللىلىتىرلىق سۇيۇقلاندۇرۇلغان ياكى
دىرىللانغان سۇ 400 مىللىمېتىردىن 1 × يۇيۇش ئېرىتمىسى ھاسىل قىلىدۇ.
【سىناق تەرتىپى】
1. ئايرىم تۇرۇبىلاردا ، تەييارلانغان HACE2-HRP ھەل قىلىش چارىسىنىڭ 120μL لىك ئالكوتى.
2. ھەر بىر تۇرۇبىغا 6 μL لىك تەڭشىگۈچ ، نامەلۇم ئەۋرىشكە ، سۈپەت كونتروللىرىنى قوشۇپ ياخشى ئارىلاشتۇرۇڭ.
3. 2-قەدەمدە تەييارلانغان ھەر بىر ئارىلاشما ماددىنىڭ 100μL ماس ھالدا ماس كېلىدىغان مىكرو قۇدۇققا يۆتكەڭ
ئالدىن سىناق قىلىنغان سەپلىمىگە.
3. تەخسىنى پېچەتلىگۈچ بىلەن يېپىپ ، ° C 37 قا 30 مىنۇت تۇرغۇزۇڭ.
4. تەخسە پېچەتلىگۈچىنى ئېلىڭ ھەمدە تەخسىنى تەخمىنەن 300 μL لىك 1 × يۇيۇش ئېرىتمىسى بىلەن تۆت قېتىم يۇيۇڭ.
5. تاختاينى قەغەز لۆڭگە چېكىپ ، يۇيۇپ بولغاندىن كېيىن قۇدۇقتىكى قالدۇق سۇيۇقلۇقنى ئېلىڭ.
6. ھەر بىر قۇدۇققا 100 μL TMB ھەل قىلىش چارىسى قوشۇڭ ھەمدە تەخسىنى 20 سېلسىيە گرادۇستىن 25 سېلسىيە گرادۇسقىچە 20 مىنۇت تۇرغۇزۇڭ.
7. ھەر بىر قۇدۇققا 50 μL توختىتىش ھەل قىلىش چارىسىنى قوشۇڭ.
8. مىكروپولات ئوقۇغۇچنىڭ سۈمۈرۈلۈشىنى 10 مىنۇت ئىچىدە 450 nm دا ئوقۇڭ (قوشۇمچە زاپچاس 630nm)
تېخىمۇ ئېنىق بولغان ئىقتىدارغا تەۋسىيە قىلىنىدۇ).