مايمۇن ۋىرۇسى (MPV) يادرو كىسلاتاسىنى بايقاش زاپچىسى

بۇ زاپچاستا 48 سىناق ياكى سۈپەت كونترول قىلىش رېئاكتورى بار ، بۇلار تۆۋەندىكى زاپچاسلارنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ:

Reagent A.

ReagentB

ئەسكەرتىش: ئوخشىمىغان تۈركۈمدىكى سانلارنىڭ زاپچاسلىرىنى ئالماشتۇرغىلى بولمايدۇ

【ساقلاش شارائىتى ۋە ساقلاش مۇددىتى】

1. رېئاكتىپ A / B نى 2-30 سېلسىيە گرادۇستا ساقلىغىلى بولىدۇ ، ساقلاش مۇددىتى 10 ئاي.

2. سىناققا تەييارلىق قىلغاندىلا سىناق نەيچىسى ياپقۇچنى ئېچىڭ.

3. سىناق ۋاقتى توشقاندىن كېيىن سىناق نەيچىسىنى ئىشلەتمەڭ.

4. ئېقىپ كەتكەن بايقاش تۇرۇبىسىنى ئىشلەتمەڭ.

【قوللىنىشچان قورال】

LC480 PCR ئانالىز سىستېمىسىغا ماس كېلىدۇ ، Gentier 48E ئاپتوماتىك PCR ئانالىز سىستېمىسى ، ABI7500 PCR ئانالىز سىستېمىسى.

【ئۈلگە تەلەپلەر】

1. قوللىنىشچان ئەۋرىشكە تىپى: كېكىردەك ئەۋرىشكىسى ئەۋرىشكىسى.

2. ئەۋرىشكە ئېلىش چارىسى:تەكشۈرۈپ ئېنىقلانغاندىن كېيىن ، ئەۋرىشكە يىغىش ئۈچۈن خاڭجۇ سىناق دېڭىز بىئولوگىيىسى ئىشلەپچىقارغان نورمال تۇز ياكى ۋىرۇسنى ساقلاش تۇرۇبىسىنى ئىشلىتىش تەۋسىيە قىلىنىدۇ.

كېكىردەك:ئىككى قېتىم يۇتقۇنچاق يەللىكى ۋە ئارقا يۇتقۇنچاق دىۋارىنى بىر قېتىم ئىشلىتىلىدىغان ستېرېلې ئەۋرىشكە ئەۋرىشكىسى بىلەن سۈرتۈپ ، لۆڭگىنى 3mL ئەۋرىشكە ئېرىتمىسى بار تۇرۇبىغا چىلاپ ، قۇيرۇقنى تاشلاپ ، تۇرۇبا ياپقۇچنى چىڭىتىڭ.

3. ئۈلگە ساقلاش ۋە يەتكۈزۈش:سىناق قىلىنىدىغان ئەۋرىشكەلەرنى تېزدىن سىناق قىلىش كېرەك.توشۇش تېمپېراتۇرىسىنى 2 ~ 8 at ساقلاش كېرەك. 24 سائەت ئىچىدە سىناق قىلغىلى بولىدىغان ئەۋرىشكىلەرنى 2 ℃ ~ 8 at دە ساقلىغىلى بولىدۇ ، ئەگەر ئەۋرىشكىنى 24 سائەت ئىچىدە سىناق قىلغىلى بولمىسا ، ئۇنى ئاز ياكى تەڭ ساقلاش كېرەك. -70 to (ئەگەر -70 of ساقلاش شارائىتى بولمىسا ، -20 at ۋاقىتلىق ساقلىغىلى بولىدۇ) ، قايتا-قايتا ساقلىنىڭ

توڭلىتىش ۋە ئېرىتىش.

4. مۇۋاپىق ئەۋرىشكە توپلاش ، ساقلاش ۋە توشۇش بۇ مەھسۇلاتنىڭ ئىقتىدارىدا ئىنتايىن مۇھىم.

【سىناق ئۇسۇلى】

1. ئۈلگە بىر تەرەپ قىلىش ۋە ئەۋرىشكە قوشۇش

1.1 ئەۋرىشكە بىر تەرەپ قىلىش

يۇقارقى ئەۋرىشكە ئېرىتمىسىنى ئەۋرىشكە بىلەن ئارىلاشتۇرغاندىن كېيىن ، 30μL ئەۋرىشكىنى DNA قويۇپ بېرىش رېئاكتىپ تۇرۇبىسىغا ئېلىپ تەكشى ئارىلاشتۇرۇڭ.

1.2 Loading

قايتا قۇرۇش رېئاكتورىنىڭ 20μL نى ئېلىپ ، ئۇنى MPV تەكشۈرۈش رېئاكتورىغا قوشۇڭ ، يۇقىرىدىكى پىششىقلاپ ئىشلەنگەن ئەۋرىشكىنىڭ 5μL نى قوشۇڭ (مۇسبەت كونترول ۋە مەنپىي كونترول ئەۋرىشكە بىلەن پاراللېل بىر تەرەپ قىلىنىدۇ) ، تۇرۇبا قالپىقىنى يېپىپ ، 2000rpm دە 10 مىنۇت ئەتراپىدا مەركەزلەشتۈرۈڭ. سېكۇنت.

2. PCR كېڭەيتىش

2.1 تەييارلانغان PCR تەخسىسى / تۇرۇبىسىنى فلۇئورېسسېنسىيە PCR ئەسۋابىغا يۈكلەڭ ، ھەر بىر سىناقتا پاسسىپ كونترول ۋە ئاكتىپ كونترول قىلىنىدۇ.

2.2 Fluorescent channel setting ：

1) MPV بايقاش ئۈچۈن FAM قانىلىنى تاللاڭ

2) ئىچكى كونترول گېننى تەكشۈرۈش ئۈچۈن HEX / VIC قانىلىنى تاللاڭ ；

3. نەتىجىنى تەھلىل قىلىش

ئاساسىي سىزىقنى مەنپىي كونترولنىڭ فلۇئورېسسېنسىيە ئەگرى سىزىقىنىڭ ئەڭ يۇقىرى نۇقتىسىغا توغرىلاڭ.

4. سۈپەت كونترول قىلىش

4.1 سەلبىي كونترول F FAM 、 HEX / VIC قانىلىدا Ct قىممىتى بايقالمىدى ، ياكى Ct ＞ 40 ；

4.2 ئاكتىپ كونترول F FAM 、 HEX / VIC قانىلىدا ، Ct≤40 ；

4.3 يۇقارقى تەلەپلەر ئوخشاش سىناقتا قاندۇرۇلۇشى كېرەك ، بولمىسا سىناق نەتىجىسى ئىناۋەتسىز ، سىناقنى تەكرارلاش كېرەك.

【قىممىتىنى كېسىڭ】

ئەۋرىشكە مۇسبەت دەپ قارىلىدۇ: نىشان تەرتىپى Ct≤40 ، ئىچكى كونترول گېنى Ct≤40.

【نەتىجىنى ئىزاھلاش】

سۈپەت كونتروللۇقىدىن ئۆتكەندىن كېيىن ، ئابونتلار HEX / VIC قانىلىدىكى ھەر بىر ئەۋرىشكە ئۈچۈن كۈچەيتمە ئەگرى سىزىق بار-يوقلۇقىنى تەكشۈرۈشى كېرەك ، ئەگەر Ct≤40 بار بولسا ، ئۇ ئىچكى كونترول گېنىنىڭ مۇۋەپپەقىيەتلىك ھالدا كۈچەيتىلگەنلىكىنى ۋە بۇ ئالاھىدە سىناقنىڭ ئۈنۈملۈك ئىكەنلىكىنى كۆرسەتتى.ئىشلەتكۈچىلەر تۆۋەندىكى تەھلىلنى داۋاملاشتۇرالايدۇ:

3. ئىچكى كونترول گېنىنىڭ كۈچەيتىلىشى بىلەن ئەۋرىشكە ئۈچۈن (HEX / VIC)

قانال ، Ct ＞ 40 ياكى كۈچەيتمە ئەگرى سىزىق يوق) ، ۋىرۇسنىڭ تۆۋەن بولۇشى ياكى PCR چەكلىگۈچنىڭ مەۋجۇت بولۇشى مەغلۇبىيەتنىڭ سەۋەبى بولۇشى مۇمكىن ، ئىمتىھان ئەۋرىشكە توپلىمىدىن تەكرارلىنىشى كېرەك.

4. مۇسبەت ئەۋرىشكە ۋە مەدەنىيەتلىك ۋىرۇسقا نىسبەتەن ، ئىچكى كونترولنىڭ نەتىجىسى تەسىر كۆرسەتمەيدۇ.

ئەۋرىشكە ئېلىپ تەكشۈرۈلگەن ئەۋرىشكىلەرگە قارىتا ، ئىچكى كونترولنى مۇسبەت سىناق قىلىش كېرەك ، بولمىسا ئومۇمىي نەتىجە ئىناۋەتسىز ، ئىمتىھاننى تەكرارلاش كېرەك ، ئەۋرىشكە يىغىش باسقۇچىدىن باشلاپ