SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit （ELISA)
【NILALAKANG PAGGAMIT】
Ang SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit ay isang Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) na nilayon para sa qualitative at semi-quantitative detection ng kabuuang neutralizing antibodies sa SARS-CoV-2 sa human serum at plasma. Ang SARS- CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit ay maaaring gamitin bilang isang tulong sa pagtukoy sa mga indibidwal na may adaptive immune response sa SARS- CoV-2, na nagpapahiwatig ng kamakailan o naunang impeksyon. Ang SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit ay hindi dapat gamitin upang masuri ang talamak na impeksyon sa SARS-CoV-2.
【PANIMULA】
Ang mga impeksyon sa coronavirus ay karaniwang nag-uudyok sa pag-neutralize ng mga tugon ng antibody. Ang mga rate ng seroconversion sa mga pasyente ng COVID-19 ay 50% at 100% sa araw na 7 at 14 pagkatapos ng simula ng sintomas, ayon sa pagkakabanggit. Upang ipakita ang kaalaman, ang katumbas na virus na neutralizing antibody sa dugo ay kinikilala bilang isang target para sa pagtukoy ng antibody efficacy at ang mas mataas na konsentrasyon ng neutralizing antibody ay nagpapahiwatig ng mas mataas na proteksyon efficacy. Ang Plaque Reduction Neutralization Test (PRNT) ay kinikilala bilang gold standard para sa pag-detect ng neutralizing antibodies. Gayunpaman, dahil sa mababang throughput nito at mas mataas na kinakailangan para sa operasyon, ang PRNT ay hindi praktikal para sa malakihang serodiagnosis at pagsusuri ng bakuna. Ang SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit ay batay sa Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) methodology, na maaaring makakita ng neutralizing antibody sa sample ng dugo pati na rin ang espesyal na pag-access sa mga antas ng konsentrasyon ng ganitong uri ng antibody.
【Pamamaraan ng Pagsubok】
1. Sa magkahiwalay na tubo, aliquot 120μL ng inihandang hACE2-HRP Solution.
2. Magdagdag ng 6 μL ng mga calibrator, hindi kilalang mga sample, mga kontrol sa kalidad sa bawat tubo at ihalo nang mabuti.
3. Ilipat ang 100μL ng bawat halo na inihanda sa hakbang 2 sa kaukulang mga balon ng microplate ayon sa predesigned na configuration ng pagsubok.
3. Takpan ang plato ng Plate Sealer at i-incubate sa 37°C sa loob ng 60 minuto.
4. Tanggalin ang Plate Sealer at hugasan ang plato na may humigit-kumulang 300 μL ng 1 × Wash Solution bawat balon nang apat na beses.
5. Tapikin ang plato sa tuwalya ng papel upang alisin ang natitirang likido sa mga balon pagkatapos ng mga hakbang sa paghuhugas.
6. Magdagdag ng 100 μL ng TMB Solution sa bawat balon at i-incubate ang plato sa madilim sa 20 – 25°C sa loob ng 20 minuto.
7. Magdagdag ng 50 μL ng Stop Solution sa bawat balon upang ihinto ang reaksyon.
8. Basahin ang absorbance sa microplate reader sa 450 nm sa loob ng 10 minuto (630nm bilang accessory ay inirerekomenda para sa mas mataas na precision performance.
