SARS-CoV-2 Antikorlary anyklaýyş toplumy (ELISA)
【INörelge】
SARS-CoV-2 Antikorlary kesgitlemek bitaraplaşdyrýan ELISA usulyýetine esaslanýar.
Arassalanan reseptor baglaýjy domeni (RBD), wirus tüýdüginden (S) belokdan we öýjükden belok
reseptor ACE2, bu synag wirus saklaýjynyň zyýansyzlandyryjy täsirini meňzeş etmek üçin döredildi.
Kalibrleýjiler, hil gözegçiligi, serum ýa-da plazma nusgalary ergin bilen aýratyn garylýar
kiçi turbalarda alikotirlenen HACE2-HRP konýugatyny öz içine alýan bufer.Soňra garyndylar geçirilýär
üçin immobilizirlenen rekombinant SARS-CoV-2 RBD bölegi (RBD) bolan mikroplat guýulary
inkubasiýa.30 minutlyk inkubasiýa wagtynda, kalibrleýjilerdäki RBD aýratyn antikor, QC we
Guýularda hereketsiz bolan RBD-ni anyk baglanyşdyrmak üçin nusgalar HACE2-HRP bilen bäsleşer.Soň
inkubasiýa, guýulmadyk HACE2-HRP konýugatyny aýyrmak üçin guýular 4 gezek ýuwulýar.Çözgüdi
Soňra TMB goşulýar we otag temperaturasynda 20 minut inkubasiýa edilýär, netijede a ösýär
gök reňk.Reňkiň ösüşi 1N HCl goşulmagy bilen togtadylýar we siňdiriş
spektrofotometrik ölçegde 450 nm.Emele gelen reňkiň intensiwligi proporsionaldyr
bar bolan fermentiň mukdary we şol bir usul bilen öwrenilen standartlaryň mukdary bilen ters baglanyşyklydyr.
Berlen kalibrleýjiler tarapyndan emele gelen kalibrleme egrisi bilen deňeşdirilende, konsentrasiýasy
näbelli nusgadaky antikorlary zyýansyzlandyrmak soň hasaplanýar.
【GEREK MATERIALLAR, ýöne üpjün edilmeýär】
1. Distillendirilen ýa-da deionizirlenen suw
2. Takyk turbalar: 10μL, 100μL, 200μL we 1 ml
3. Bir gezek ulanylýan turbanyň maslahatlary
4. 450nm-de siňdirişi okamaga ukyply mikroplat okyjy.
5. Absorbent kagyz
6. Grafik kagyzy
7. Worteks mikser ýa-da şoňa meňzeş
【ECörite ýygnamak we saklamak】
1. Bu toplum üçin K2-EDTA bolan turbalarda ýygnan serum we plazma nusgalary ulanylyp bilner.
2. Mysallar ýapylmaly we barlagdan ozal 2 ° C - 8 ° C derejesinde 48 sagada çenli saklanyp bilner.
Has uzak wagtlap (6 aýa çenli) saklanýan nusgalar, barlagdan öň diňe -20 ° C-de doňmaly.
Gaýtadan doňdurma sikllerinden gaça duruň.
PROTOKOL
【Reagent taýýarlygy】
1. rehli reagentler holodilnikden çykarylmaly we ulanmazdan ozal otag temperaturasyna gaýdyp gelmeli
(20 ° 25 ° C).Rehli reagentleri ulanylandan soň derrew holodilnikde saklaň.
2. Samhli nusgalar we gözegçilikler ulanylmazdan ozal worteksirlenmeli.
3. hACE2-HRP çözgüdi taýýarlamak: HACE2-HRP konsentratyny Dilution bilen 1: 51 eritme derejesinde konsentratirläň
Bufer.Mysal üçin, 100 μL HACE2-HRP konsentratyny 5.0mL HRP Dilution Bufer bilen suwuklandyryň
hACE2-HRP çözgüdi düzüň.
4. 1 × Washuw çözgüdini taýýarlamak: 20 × ýuwujy çözgüdi deionizasiýa edilen ýa-da distillendirilen suw bilen a
ses gatnaşygy 1:19.Mysal üçin, 20 ml 20 × ýuwujy ergini 380 ml deionizirlenen ýa-da
distillendirilen suw 400 ml 1 × ýuwujy ergin.
【Synag tertibi】
1. Aýry turbalarda, taýýarlanan HACE2-HRP çözgüdinden 120μL alikot.
2. Her turbada 6 μL kalibrleýjini, näbelli nusgalary, hil gözegçiligini goşuň we gowy garmaly.
3. 2-nji ädimde taýýarlanan her garyndynyň 100μL-i degişli mikroplat guýularyna geçiriň
deslapky synag konfigurasiýasyna.
3. Tabagy “Selate Sealer” bilen örtüň we 37 ° C-de 30 minut inkubasiýa ediň.
4. Tabak möhürçisini aýyryň we tabagy takmynan 300 μL 1 × ýuwujy ergin bilen dört gezek ýuwuň.
5. stepsdimleri ýuwandan soň guýulardaky galyndy suwuklygy aýyrmak üçin tabagy kagyz polotensasyna basyň.
6. Her guýa 100 μL TMB Solution goşuň we tabagy 20-25 ° C-de 20 minutlap garaňkyda saklaň.
7. Reaksiýany duruzmak üçin her guýa 50 μL Stop Solution goşuň.
8. Mikroplata okyjynyň siňdirilişini 10 minutyň içinde (aksesuar bolşy ýaly 630nm) 450 nm okaň
has takyk öndürijiligi üçin maslahat berilýär).
