ชุดตรวจจับแอนติบอดีที่ทำให้เป็นกลางของ SARS-CoV-2 (ELISA)

-วัตถุประสงค์การใช้งาน-

ชุดตรวจหาแอนติบอดีที่เป็นกลางของ SARS-CoV-2 คือชุดทดสอบอิมมูโนซอร์เบนท์ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ที่แข่งขันได้ (ELISA) ซึ่งมีจุดมุ่งหมายสำหรับการตรวจหาแอนติบอดีที่เป็นกลางทั้งหมดในซีรั่มและพลาสมาของมนุษย์ในเชิงคุณภาพและกึ่งปริมาณ ชุดตรวจหาแอนติบอดีที่เป็นกลางของ SARS- CoV-2 สามารถใช้เป็นตัวช่วยในการระบุบุคคลที่มีการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันที่ปรับตัวได้ต่อ SARS- CoV-2 ซึ่งบ่งบอกถึงการติดเชื้อล่าสุดหรือก่อนหน้า ไม่ควรใช้ชุดตรวจหาแอนติบอดีที่เป็นกลางของ SARS-CoV-2 เพื่อวินิจฉัยการติดเชื้อเฉียบพลันของ SARS-CoV-2

-การแนะนำ-

การติดเชื้อโคโรนาไวรัสมักกระตุ้นให้เกิดการตอบสนองของแอนติบอดีที่เป็นกลาง อัตราการเปลี่ยนแปลงของซีโรคอนเวอร์ชันในผู้ป่วยโควิด-19 คือ 50% และ 100% ในวันที่ 7 และ 14 หลังเริ่มมีอาการ ตามลำดับ เพื่อนำเสนอความรู้ แอนติบอดีที่ทำให้ไวรัสเป็นกลางในเลือดได้รับการยอมรับว่าเป็นเป้าหมายในการพิจารณาประสิทธิภาพของแอนติบอดี และความเข้มข้นที่สูงขึ้นของแอนติบอดีที่เป็นกลางจะบ่งชี้ถึงประสิทธิภาพการป้องกันที่สูงขึ้น การทดสอบการทำให้เป็นกลางในการลดคราบจุลินทรีย์ (PRNT) ได้รับการยอมรับว่าเป็นมาตรฐานทองคำสำหรับการตรวจจับแอนติบอดีที่เป็นกลาง อย่างไรก็ตาม เนื่องจากมีปริมาณงานต่ำและมีข้อกำหนดในการดำเนินการสูงกว่า PRNT จึงไม่เหมาะกับการวินิจฉัยซีโรไดนามิกขนาดใหญ่และการประเมินวัคซีน ชุดตรวจหาแอนติบอดีที่ทำให้เป็นกลางของ SARS-CoV-2 ยึดหลักวิธี Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) ซึ่งสามารถตรวจจับแอนติบอดีที่ทำให้เป็นกลางในตัวอย่างเลือดได้ รวมถึงเข้าถึงระดับความเข้มข้นของแอนติบอดีประเภทนี้เป็นพิเศษ

 -ขั้นตอนการทดสอบ-

1. ในหลอดที่แยกจากกัน ให้แบ่งสารละลาย hACE2-HRP ที่เตรียมไว้ 120μL

2.เติมเครื่องสอบเทียบ 6 μL ตัวอย่างที่ไม่รู้จัก การควบคุมคุณภาพในแต่ละหลอด และผสมให้เข้ากัน

3. ถ่ายโอน 100μL ของส่วนผสมแต่ละรายการที่เตรียมในขั้นตอนที่ 2 ลงในหลุมไมโครเพลทที่สอดคล้องกันตามการกำหนดค่าการทดสอบที่ออกแบบไว้ล่วงหน้า

3.ปิดจานด้วย Plate Sealer และฟักที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 60 นาที

4.นำเพลทซีลเลอร์ออกแล้วล้างเพลทด้วยน้ำยาล้าง 1× ประมาณ 300 ไมโครลิตร ต่อหลุม 4 ครั้ง

5.แตะจานบนผ้ากระดาษเพื่อขจัดของเหลวที่ตกค้างในบ่อหลังจากขั้นตอนการล้าง

6.เติม TMB Solution 100 µL ลงในแต่ละหลุม และบ่มจานในที่มืดที่อุณหภูมิ 20 – 25°C เป็นเวลา 20 นาที

7. เติม Stop Solution 50 ไมโครลิตรในแต่ละหลุมเพื่อหยุดปฏิกิริยา

8. อ่านค่าการดูดกลืนแสงในตัวอ่านไมโครเพลทที่ 450 นาโนเมตรภายใน 10 นาที (แนะนำให้ใช้ 630 นาโนเมตรเป็นอุปกรณ์เสริมเพื่อประสิทธิภาพที่แม่นยำยิ่งขึ้น