Маҷмӯаи ташхиси антителоҳои безараргардонандаи SARS-CoV-2 (ELISA)
【ИСТИФОДАИ МАКСАД】
Маҷмӯаи муайянкунии антителоҳои безараргардонандаи SARS-CoV-2 як таҳлили рақобатпазири бо фермент вобаста ба иммуносорбент (ELISA) мебошад, ки барои муайянкунии сифатӣ ва ниммикдории антителоҳои умумии безараргардонии SARS-CoV-2 дар хуноба ва плазмаи инсон пешбинӣ шудааст. Маҷмӯаи муайянкунии антителоҳои безараргардонии SARS-CoV-2 метавонад ҳамчун кӯмак барои муайян кардани ашхоси дорои аксуламали иммунии мутобиқшавӣ ба SARS-CoV-2 истифода шавад, ки сирояти охирин ё қаблиро нишон медиҳад. Маҷмӯаи ташхиси антителоҳои безараргардонандаи SARS-CoV-2 набояд барои ташхиси сирояти шадиди SARS-CoV-2 истифода шавад.
【МУҚАДДИМА】
Сироятҳои коронавирус одатан вокунишҳои безараргардонии антителоҳоро ба вуҷуд меоранд. Сатҳи сероконверсия дар беморони COVID-19 дар рӯзи 7 ва 14 пас аз фарорасии аломат мутаносибан 50% ва 100% -ро ташкил медиҳад. Барои пешниҳоди дониш, антителоҳои дахлдори безараргардонии вирус дар хун ҳамчун ҳадаф барои муайян кардани самаранокии антитело эътироф карда мешаванд ва консентратсияи баландтари антителоҳои безараркунанда аз самаранокии баланди муҳофизат шаҳодат медиҳанд. Санҷиши коҳиши безараргардонии лавҳа (PRNT) ҳамчун стандарти тиллоӣ барои муайян кардани антителоҳои безараркунанда эътироф шудааст. Аммо, аз сабаби қобилияти пасти он ва талаботи баландтар барои амалиёт, PRNT барои серодиагностикаи миқёси васеъ ва арзёбии ваксина амалӣ нест. Маҷмӯаи муайянкунии антителоҳои безараргардонандаи SARS-CoV-2 ба методологияи таҳлили рақобатпазири иммуносорбенти бо фермент алоқаманд (ELISA) асос ёфтааст, ки метавонад антителоҳои безараркунандаро дар намунаи хун муайян кунад ва инчунин ба сатҳи консентратсияи ин навъи антитело дастрасӣ пайдо кунад.
【Тартиби санҷиш】
1.Дар қубурҳои алоҳида, аликвот 120 мкл аз маҳлули тайёршудаи hACE2-HRP.
2. 6 мкл калибраторҳо, намунаҳои номаълум, назорати сифатро дар ҳар як қубур илова кунед ва хуб омехта кунед.
3. 100 мкл ҳар як омехтаи дар қадами 2 омодашударо ба чоҳҳои мувофиқи микроплата мувофиқи конфигуратсияи санҷишии пешакӣ тарҳрезишуда интиқол диҳед.
3.Табақро бо плиткаи пломбадор пӯшонед ва дар ҳарорати 37°C барои 60 дақиқа инкубатсия кунед.
4. Пули пломбаро хориҷ кунед ва табақро бо тақрибан 300 мкл Маҳлули шустани 1× барои ҳар як чоҳ чор маротиба бишӯед.
5.Табақро рӯи дастмоле коғаз пахш кунед, то моеъи боқимондаро дар чоҳҳо пас аз шустани қадамҳо тоза кунед.
6. Ба ҳар як чоҳ 100 мкл Маҳлули TMB илова кунед ва табақро дар торикӣ дар ҳарорати 20 – 25°C барои 20 дақиқа инкубатсия кунед.
7. Барои боздоштани реаксия ба ҳар як чоҳ 50 мкл Маҳлули Stop илова кунед.
8. Дар давоми 10 дақиқа абсорбенсро дар хонандаи микроплата дар 450 нм хонед (630 нм ҳамчун лавозимот барои иҷрои дақиқи баландтар тавсия дода мешавад.
