SARS-CoV-2 நடுநிலையாக்கும் ஆன்டிபாடி கண்டறிதல் கிட் (ELISA)

【நோக்கம் கொண்ட பயன்பாடு】

SARS-CoV-2 நடுநிலையாக்கும் ஆன்டிபாடி கண்டறிதல் கிட் என்பது மனித சீரம் மற்றும் பிளாஸ்மாவில் உள்ள SARS-CoV-2 க்கு மொத்த நடுநிலையான ஆன்டிபாடிகளை தரமான மற்றும் அரை-அளவு கண்டறிவதற்காக வடிவமைக்கப்பட்ட ஒரு போட்டி என்சைம்-இணைக்கப்பட்ட இம்யூனோசார்பன்ட் அஸ்ஸே (ELISA) ஆகும். SARS-CoV-2 நடுநிலையாக்கும் ஆன்டிபாடி கண்டறிதல் கிட், SARS-CoV-2 க்கு தகவமைப்பு நோயெதிர்ப்பு மறுமொழியைக் கொண்ட நபர்களை அடையாளம் காண ஒரு உதவியாகப் பயன்படுத்தப்படலாம், இது சமீபத்திய அல்லது முந்தைய தொற்றுநோயைக் குறிக்கிறது. கடுமையான SARS-CoV-2 நோய்த்தொற்றைக் கண்டறிய SARS-CoV-2 நடுநிலையாக்கும் ஆன்டிபாடி கண்டறிதல் கருவியைப் பயன்படுத்தக்கூடாது.

【அறிமுகம்】

கொரோனா வைரஸ் தொற்றுகள் பொதுவாக ஆன்டிபாடி பதில்களை நடுநிலையாக்குகின்றன. கோவிட்-19 நோயாளிகளின் செரோகான்வெர்ஷன் விகிதங்கள் முறையே 7 மற்றும் 14 ஆம் நாள் அறிகுறி தோன்றிய நாட்களில் 50% மற்றும் 100% ஆகும். அறிவை முன்வைக்க, இரத்தத்தில் உள்ள வைரஸ் நடுநிலையாக்கும் ஆன்டிபாடி, ஆன்டிபாடி செயல்திறனை தீர்மானிப்பதற்கான இலக்காக அங்கீகரிக்கப்பட்டுள்ளது மற்றும் நடுநிலைப்படுத்தும் ஆன்டிபாடியின் அதிக செறிவு அதிக பாதுகாப்பு செயல்திறனைக் குறிக்கிறது. பிளேக் குறைப்பு நியூட்ராலைசேஷன் சோதனை (PRNT) நடுநிலைப்படுத்தும் ஆன்டிபாடிகளைக் கண்டறிவதற்கான தங்கத் தரமாக அங்கீகரிக்கப்பட்டுள்ளது. இருப்பினும், அதன் குறைந்த செயல்திறன் மற்றும் செயல்பாட்டிற்கான அதிக தேவை காரணமாக, பெரிய அளவிலான செரோடியோக்னோசிஸ் மற்றும் தடுப்பூசி மதிப்பீட்டிற்கு PRNT நடைமுறையில் இல்லை. SARS-CoV-2 நடுநிலையாக்கும் ஆன்டிபாடி கண்டறிதல் கிட், போட்டி என்சைம்-இணைக்கப்பட்ட இம்யூனோசார்பன்ட் அஸ்ஸே (ELISA) முறையை அடிப்படையாகக் கொண்டது, இது இரத்த மாதிரியில் நடுநிலைப்படுத்தும் ஆன்டிபாடியைக் கண்டறியும் மற்றும் இந்த வகை ஆன்டிபாடியின் செறிவு அளவை சிறப்பாக அணுகும்.

 【சோதனை நடைமுறை】

1.தனியான குழாய்களில், தயாரிக்கப்பட்ட hACE2-HRP தீர்வு 120μL.

2.ஒவ்வொரு குழாயிலும் 6 μL அளவீடுகள், அறியப்படாத மாதிரிகள், தரக் கட்டுப்பாடுகள் ஆகியவற்றைச் சேர்த்து நன்கு கலக்கவும்.

3.படி 2 இல் தயாரிக்கப்பட்ட ஒவ்வொரு கலவையின் 100μLஐ, முன்னரே வடிவமைக்கப்பட்ட சோதனை கட்டமைப்பின்படி தொடர்புடைய மைக்ரோ பிளேட் கிணறுகளுக்கு மாற்றவும்.

3.தட்டை ப்ளேட் சீலரால் மூடி, 37°C வெப்பநிலையில் 60 நிமிடங்கள் அடைகாக்கவும்.

4. ப்ளேட் சீலரை அகற்றி, ஒரு கிணற்றுக்கு தோராயமாக 300 μL 1× வாஷ் கரைசல் கொண்டு தட்டை நான்கு முறை கழுவவும்.

5. படிகளை கழுவிய பின் கிணறுகளில் எஞ்சியிருக்கும் திரவத்தை அகற்ற காகித துண்டு மீது தட்டு தட்டவும்.

6.ஒவ்வொரு கிணற்றிலும் 100 μL TMB கரைசலைச் சேர்த்து, 20 நிமிடங்களுக்கு 20 - 25°C வெப்பநிலையில் தட்டை இருட்டில் அடைக்கவும்.

7. வினையை நிறுத்த ஒவ்வொரு கிணற்றிலும் 50 μL ஸ்டாப் சொல்யூஷனைச் சேர்க்கவும்.

8. மைக்ரோ பிளேட் ரீடரில் உள்ள உறிஞ்சுதலை 450 nm இல் 10 நிமிடங்களுக்குள் படிக்கவும் (அதிக துல்லியமான செயல்திறனுக்காக 630nm துணைப் பொருளாக பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.