SARS-COV-2 நடுநிலைப்படுத்தும் ஆன்டிபாடி கண்டறிதல் கிட் （ELISA)

【நோக்கம் கொண்ட பயன்பாடு】

SARS-COV-2 நடுநிலைப்படுத்தும் ஆன்டிபாடி கண்டறிதல் கிட் என்பது மனித சீரம் மற்றும் பிளாஸ்மாவில் SARS-COV-2 க்கு மொத்த நடுநிலைப்படுத்தும் ஆன்டிபாடிகளை தரமான மற்றும் அரை அளவிலான கண்டறிதலுக்காக வடிவமைக்கப்பட்ட ஒரு போட்டி என்சைம்-இணைக்கப்பட்ட இம்யூனோசார்பென்ட் மதிப்பீடு (ELISA) ஆகும். SARS- COV-2 நடுநிலைப்படுத்தும் ஆன்டிபாடி கண்டறிதல் கிட், SARS- COV-2 க்கு தகவமைப்பு நோயெதிர்ப்பு மறுமொழியைக் கொண்ட நபர்களை அடையாளம் காண்பதில் ஒரு உதவியாகப் பயன்படுத்தப்படலாம், இது சமீபத்திய அல்லது முந்தைய தொற்றுநோயைக் குறிக்கிறது. கடுமையான SARS-COV-2 நோய்த்தொற்றைக் கண்டறிய SARS-COV-2 நடுநிலைப்படுத்தும் ஆன்டிபாடி கண்டறிதல் கிட் பயன்படுத்தப்படக்கூடாது.

【அறிமுகம்】

கொரோனவைரஸ் நோய்த்தொற்றுகள் பொதுவாக ஆன்டிபாடி பதில்களை நடுநிலையாக்குகின்றன. கோவ் -19 நோயாளிகளில் செரோகான்வெர்ஷன் விகிதங்கள் முறையே 7 மற்றும் 14 வது நாளில் 50% மற்றும் 100% ஆகும். அறிவை முன்வைக்க, தொடர்புடைய வைரஸ் இரத்தத்தில் ஆன்டிபாடியை நடுநிலையாக்குவது ஆன்டிபாடி செயல்திறனை தீர்மானிப்பதற்கான இலக்காக அங்கீகரிக்கப்பட்டுள்ளது மற்றும் நடுநிலைப்படுத்தும் ஆன்டிபாடியின் அதிக செறிவு அதிக பாதுகாப்பு செயல்திறனைக் குறிக்கிறது. பிளேக் குறைப்பு நடுநிலைப்படுத்தல் சோதனை (பி.ஆர்.என்.டி) நடுநிலையான ஆன்டிபாடிகளைக் கண்டறிவதற்கான தங்கத் தரமாக அங்கீகரிக்கப்பட்டுள்ளது. இருப்பினும், அதன் குறைந்த செயல்திறன் மற்றும் செயல்பாட்டிற்கான அதிக தேவை காரணமாக, பெரிய அளவிலான செரோடியாக்னோசிஸ் மற்றும் தடுப்பூசி மதிப்பீட்டிற்கு பி.ஆர்.என்.டி நடைமுறையில் இல்லை. SARS-COV-2 நடுநிலைப்படுத்தும் ஆன்டிபாடி கண்டறிதல் கிட் போட்டி என்சைம்-இணைக்கப்பட்ட இம்யூனோசார்பென்ட் மதிப்பீடு (ELISA) முறையை அடிப்படையாகக் கொண்டது, இது இரத்த மாதிரியில் நடுநிலைப்படுத்தும் ஆன்டிபாடியைக் கண்டறிந்து, இந்த வகை ஆன்டிபாடியின் செறிவு அளவை சிறப்பாக அணுக முடியும்.

 【சோதனை செயல்முறை】

1. தனி குழாய்களில், தயாரிக்கப்பட்ட HACE2-HRP கரைசலின் அலிகோட் 120μl.

2. 6 μl அளவுத்திருத்தங்கள், அறியப்படாத மாதிரிகள், ஒவ்வொரு குழாயிலும் தரக் கட்டுப்பாடுகள் மற்றும் நன்கு கலக்கவும்.

3. ஒவ்வொரு கலவையின் 100μl ஐ படி 2 இல் தயாரிக்கப்பட்ட மைக்ரோ பிளேட் கிணறுகளில் முன்கூட்டியே வழங்கப்பட்ட சோதனை உள்ளமைவின் படி தயாரிக்கப்படுகிறது.

3. தட்டு சீலருடன் தட்டு மற்றும் 37 ° C க்கு 60 நிமிடங்கள் அடைக்கவும்.

4. தட்டு சீலரை அகற்றி, நான்கு மடங்கு ஒரு கிணற்றுக்கு 1 × கழுவும் கரைசலில் தோராயமாக 300 μL உடன் தட்டைக் கழுவவும்.

5. படிகளை கழுவிய பின் கிணறுகளில் எஞ்சியிருக்கும் திரவத்தை அகற்ற காகித துண்டில் தட்டைக் கட்டுங்கள்.

6. ஒவ்வொரு கிணற்றுக்கும் 100 μL TMB கரைசலைச் செய்து, தட்டை 20 - 25 ° C க்கு 20 நிமிடங்கள் இருட்டில் அடைக்கவும்.

7. எதிர்வினையை நிறுத்த ஒவ்வொரு கிணற்றுக்கும் 50 μl நிறுத்தக் கரைசலைச் சேர்க்கவும்.

8. மைக்ரோ பிளேட் ரீடரில் உறிஞ்சுதலைப் படியுங்கள் 10 நிமிடங்களுக்குள் 450 என்.எம் (630nm அதிக துல்லியமான செயல்திறனுக்கு துணை பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.