Monkeypox Virus (MPV) நியூக்ளிக் அமிலம் கண்டறிதல் கருவி

கிட்டில் பின்வரும் கூறுகள் உட்பட 48 சோதனைகள் அல்லது தரக் கட்டுப்பாட்டைச் செயலாக்குவதற்கான எதிர்வினைகள் உள்ளன:

ரீஜென்ட் ஏ

வினைப்பொருள்B

குறிப்பு: வெவ்வேறு தொகுதி எண்களின் கூறுகளை ஒன்றுக்கொன்று மாற்றாகப் பயன்படுத்த முடியாது

【சேமிப்பு நிலைமைகள் மற்றும் அடுக்கு வாழ்க்கை】

1.Reagent A/B 2-30°C இல் சேமிக்கப்படும், மற்றும் அடுக்கு வாழ்க்கை 10 மாதங்கள் ஆகும்.

2.தயவுசெய்து சோதனைக்கு தயாராக இருக்கும் போது மட்டுமே சோதனைக் குழாய் அட்டையைத் திறக்கவும்.

3.காலாவதி தேதிக்கு அப்பால் சோதனைக் குழாய்களைப் பயன்படுத்த வேண்டாம்.

4.கசிவு கண்டறிதல் குழாயைப் பயன்படுத்த வேண்டாம்.

【பொருந்தக்கூடிய கருவி】

LC480 PCR பகுப்பாய்வு அமைப்பு, Gentier 48E தானியங்கி PCR பகுப்பாய்வு அமைப்பு, ABI7500 PCR பகுப்பாய்வு அமைப்புக்கு ஏற்றது.

【மாதிரி தேவைகள்】

1.பொருந்தக்கூடிய மாதிரி வகைகள்: தொண்டை சவ்வு மாதிரிகள்.

2. மாதிரி தீர்வு:சரிபார்த்த பிறகு, மாதிரி சேகரிப்புக்கு ஹாங்க்சோ டெஸ்சீ உயிரியலால் தயாரிக்கப்பட்ட சாதாரண உப்பு அல்லது வைரஸ் பாதுகாப்புக் குழாயைப் பயன்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.

தொண்டை சவ்வு:இருதரப்பு குரல்வளை டான்சில்ஸ் மற்றும் பின்பக்க குரல்வளை சுவரை டிஸ்போசபிள் மலட்டு மாதிரி துடைப்பால் துடைத்து, 3mL மாதிரி கரைசல் உள்ள குழாயில் ஸ்வாப்பை மூழ்கடித்து, வால் பகுதியை தூக்கி எறிந்து, குழாய் அட்டையை இறுக்கவும்.

3. மாதிரி சேமிப்பு மற்றும் விநியோகம்:பரிசோதிக்கப்பட வேண்டிய மாதிரிகள் கூடிய விரைவில் பரிசோதிக்கப்பட வேண்டும்.போக்குவரத்து வெப்பநிலை 2 ~ 8℃ இல் வைக்கப்பட வேண்டும். 24 மணி நேரத்திற்குள் சோதனை செய்யக்கூடிய மாதிரிகள் 2℃~ 8℃ இல் சேமிக்கப்படும் மற்றும் மாதிரிகள் 24 மணி நேரத்திற்குள் சோதிக்கப்படாவிட்டால், அது குறைவாகவோ அல்லது சமமாகவோ சேமிக்கப்பட வேண்டும். -70℃ வரை (சேமிப்பு நிலை -70℃ இல்லை என்றால், அதை தற்காலிகமாக -20℃ இல் சேமிக்கலாம்), மீண்டும் மீண்டும் செய்வதைத் தவிர்க்கவும்

உறைதல் மற்றும் கரைதல்.

4. சரியான மாதிரி சேகரிப்பு, சேமிப்பு மற்றும் போக்குவரத்து ஆகியவை இந்த தயாரிப்பின் செயல்திறனுக்கு முக்கியமானவை.

【சோதனை முறை】

1.மாதிரி செயலாக்கம் மற்றும் மாதிரி சேர்த்தல்

1.1 மாதிரி செயலாக்கம்

மேலே உள்ள மாதிரி கரைசலை மாதிரிகளுடன் கலந்த பிறகு, 30μL மாதிரியை டிஎன்ஏ வெளியீட்டு ரீஜென்ட் குழாயில் எடுத்து சமமாக கலக்கவும்.

1.2 ஏற்றுகிறது

20μL மறுசீரமைப்பு மறுஉருவாக்கத்தை எடுத்து, அதை MPV கண்டறிதல் மறுஉருவாக்கத்தில் சேர்க்கவும், மேலே உள்ள செயலாக்கப்பட்ட மாதிரியில் 5μL சேர்க்கவும் (நேர்மறை கட்டுப்பாடு மற்றும் எதிர்மறை கட்டுப்பாடு மாதிரிகளுக்கு இணையாக செயலாக்கப்படும்), குழாய் தொப்பியை மூடி, 2000rpm இல் 10 க்கு மையவிலக்கு வினாடிகள்.

2. PCR பெருக்கம்

2.1 ஃப்ளோரசன்ஸ் PCR கருவியில் தயாரிக்கப்பட்ட PCR தட்டு/குழாய்களை ஏற்றவும், ஒவ்வொரு சோதனைக்கும் எதிர்மறை கட்டுப்பாடு மற்றும் நேர்மறை கட்டுப்பாடு அமைக்கப்படும்.

2.2 ஃப்ளோரசன்ட் சேனல் அமைப்பு

1) MPV கண்டறிதலுக்கு FAM சேனலைத் தேர்வு செய்யவும்

2)உள்கட்டுப்பாட்டு மரபணு கண்டறிதலுக்கு HEX/VIC சேனலைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்

3.முடிவுகளின் பகுப்பாய்வு

எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டின் ஃப்ளோரசன்ட் வளைவின் மிக உயர்ந்த புள்ளிக்கு மேலே அடிப்படைக் கோட்டை அமைக்கவும்.

4.தரக் கட்டுப்பாடு

4.1 எதிர்மறை கட்டுப்பாடு: FAM, HEX/VIC சேனல் அல்லது Ct＞40; இல் Ct மதிப்பு கண்டறியப்படவில்லை

4.2 நேர்மறை கட்டுப்பாடு: FAM இல், ஹெக்ஸ்/விஐசி சேனல், Ct≤40;

4.3 மேலே உள்ள தேவைகள் அதே பரிசோதனையில் பூர்த்தி செய்யப்பட வேண்டும், இல்லையெனில் சோதனை முடிவுகள் தவறானவை மற்றும் பரிசோதனையை மீண்டும் செய்ய வேண்டும்.

【மதிப்பை துண்டிக்கவும்】

ஒரு மாதிரி நேர்மறையாகக் கருதப்படும் போது: இலக்கு வரிசை Ct≤40, உள் கட்டுப்பாட்டு மரபணு Ct≤40.

【முடிவுகளின் விளக்கம்】

தரக் கட்டுப்பாடு நிறைவேற்றப்பட்டதும், பயனர்கள் HEX/VIC சேனலில் உள்ள ஒவ்வொரு மாதிரிக்கும் ஒரு பெருக்க வளைவு உள்ளதா என்பதைச் சரிபார்க்க வேண்டும், Ct≤40 உடன் இருந்தால், உள்கட்டுப்பாட்டு மரபணு வெற்றிகரமாக பெருக்கப்பட்டது மற்றும் இந்த குறிப்பிட்ட சோதனை செல்லுபடியாகும்.பயனர்கள் பின்தொடர்தல் பகுப்பாய்விற்கு செல்லலாம்:

3.உள் கட்டுப்பாட்டு மரபணுவின் பெருக்கத்துடன் கூடிய மாதிரிகள் தோல்வியடைந்தன (HEX/VIC

சேனல், Ct＞40, அல்லது பெருக்க வளைவு இல்லை), குறைந்த வைரஸ் சுமை அல்லது PCR இன்ஹிபிட்டரின் இருப்பு தோல்விக்கு காரணமாக இருக்கலாம், மாதிரி சேகரிப்பில் இருந்து பரிசோதனை மீண்டும் செய்யப்பட வேண்டும்;

4. நேர்மறை மாதிரிகள் மற்றும் வளர்ப்பு வைரஸ்களுக்கு, உள் கட்டுப்பாட்டின் முடிவுகள் பாதிக்காது;

மாதிரிகள் எதிர்மறையாக சோதிக்கப்பட்டால், உள் கட்டுப்பாடு நேர்மறையாக சோதிக்கப்பட வேண்டும், இல்லையெனில் ஒட்டுமொத்த முடிவு தவறானது மற்றும் மாதிரி சேகரிப்பு படியில் இருந்து பரிசோதனையை மீண்டும் செய்ய வேண்டும்.