SARS-CoV-2 Kupunguza Kitengo cha Ugunduzi wa Antibody (ELISA)
【Kanuni】
Kitengo cha kugundua antibody cha SARS-2 kinatokana na mbinu ya ushindani ya ELISA.
Kutumia kikoa cha receptor kilichosafishwa (RBD), protini kutoka kwa protini ya virusi (S) na kiini cha mwenyeji
Receptor ACE2, mtihani huu umeundwa kuiga mwingiliano wa mwenyeji wa virusi.
Calibrators, udhibiti wa ubora, na sampuli za serum au plasma zimechanganywa vizuri katika dilution
Buffer iliyo na HACE2-HRP conjugate aliorodheshwa kwenye zilizopo ndogo. Basi mchanganyiko huhamishwa
Visima vya microplate vyenye vipande vya SARS-CoV-2 RBD (RBD) kwa (RBD) kwa
incubation. Wakati wa incubation ya dakika 30, antibody maalum ya RBD katika calibrators, QC na
Sampuli zitashindana na HACE2-HRP kwa kumfunga maalum RBD iliyoingizwa kwenye visima. Baada ya
Incubation, visima vimeoshwa mara 4 ili kuondoa conjugate isiyozuiliwa ya HACE2-HRP. Suluhisho la
TMB basi huongezwa na incubated kwa dakika 20 kwa joto la kawaida, na kusababisha maendeleo ya a
rangi ya bluu. Ukuaji wa rangi umesimamishwa na nyongeza ya 1n HCl, na kunyonya ni
Vipimo vya kuvutia kwa 450 nm. Nguvu ya rangi inayoundwa ni sawa na
Kiasi cha enzyme iliyopo, na inahusiana sana na kiasi cha viwango vilivyowekwa kwa njia ile ile.
Kupitia kulinganisha na curve ya calibration inayoundwa na calibrators zilizotolewa, mkusanyiko wa
Kupunguza kinga katika sampuli isiyojulikana basi huhesabiwa.
【Vifaa vinavyohitajika lakini havipewi】
1. Maji yaliyosafishwa au ya deionized
2. Mabomba ya usahihi: 10μl, 100μl, 200μl na 1 ml
3. Vidokezo vya bomba
4. Msomaji wa Microplate anayeweza kusoma kwa 450nm.
5. Karatasi ya kunyonya
6. Karatasi ya Grafu
7. Mchanganyiko wa Vortex au sawa
【Mkusanyiko wa mfano na uhifadhi】
1. Sampuli za serum na plasma zilizokusanywa kwenye zilizopo zilizo na K2-EDTA zinaweza kutumika kwa kit hiki.
2. Vielelezo vinapaswa kushikwa na vinaweza kuhifadhiwa kwa hadi masaa 48 kwa 2 ° C - 8 ° C kabla ya kuchukua.
Vielelezo vilivyofanyika kwa muda mrefu (hadi miezi 6) vinapaswa kugandishwa mara moja tu kwa -20 ° C kabla ya kuchukua.
Epuka mzunguko wa kufungia-thaw mara kwa mara.
Itifaki
【Maandalizi ya reagent】
1. Reagents zote lazima zichukuliwe kutoka kwenye jokofu na kuruhusiwa kurudi kwenye joto la kawaida kabla ya matumizi
(20 ° hadi 25 ° C). Hifadhi vitunguu vyote kwenye jokofu mara moja baada ya matumizi.
2. Sampuli zote na udhibiti unapaswa kupigwa kabla ya matumizi.
3. Maandalizi ya Suluhisho
Buffer. Kwa mfano, ongeza 100 μL ya HACE2-HRP inazingatia na 5.0ml ya buffer ya HRP ya HRP hadi
Tengeneza suluhisho la HACE2-HRP.
4. 1 × Matayarisho ya Suluhisho la Osha: Ongeza suluhisho la Osha 20 × na maji ya deionized au yaliyosafishwa na
Kiwango cha kiwango cha 1:19. Kwa mfano, ongeza mililita 20 ya suluhisho la safisha 20 × na 380 ml ya deionized au
Maji yaliyosafishwa kutengeneza mililita 400 ya suluhisho la safisha 1 ×.
【Utaratibu wa mtihani】
1. Katika zilizopo tofauti, aliquot 120μl ya suluhisho la Hace2-HRP lililoandaliwa.
2. Ongeza 6 μL ya calibrators, sampuli zisizojulikana, udhibiti wa ubora katika kila bomba na uchanganye vizuri.
.
kwa usanidi wa mtihani uliopangwa.
3. Funika sahani na sealer ya sahani na incubate kwa 37 ° C kwa dakika 30.
4. Ondoa muuzaji wa sahani na osha sahani na takriban 300 μL ya suluhisho la safisha 1 × kwa kila mara nne.
5. Gonga sahani kwenye kitambaa cha karatasi ili kuondoa kioevu cha mabaki kwenye visima baada ya hatua za kuosha.
6. Ongeza 100 μL ya suluhisho la TMB kwa kila kisima na uhamasishe sahani kwenye giza saa 20 - 25 ° C kwa dakika 20.
7. Ongeza 50 μL ya suluhisho la kusimamisha kwa kila kisima ili kuzuia majibu.
8. Soma uwekaji katika msomaji wa microplate kwa 450 nm ndani ya dakika 10 (630nm kama nyongeza ni
ilipendekezwa kwa utendaji wa usahihi wa hali ya juu).