SARS-COV-2 Neutraliserande antikroppsdetekteringssats (ELISA)
【PRINCIP】
SARS-CoV-2 neutraliserande antikroppsdetekteringssats är baserat på konkurrenskraftig ELISA-metodik.
Med hjälp av renad receptorbindande domän (RBD), protein från det virala spik (er) -proteinet och värdcellen
Receptor ACE2, detta test är utformat för att härma virus-värd neutraliserande interaktion.
Kalibratorer, kvalitetskontroller och serum- eller plasmaprover blandas individuellt väl i utspädning
Buffert som innehåller HACE2-HRP-konjugat som alikvats i små rör. Sedan överförs blandningarna
Mikroplattbrunnarna som innehåller immobiliserad rekombinant SARS-CoV-2 RBD-fragment (RBD) för
inkubation. Under den 30 minuters inkubationen var RBD-specifika antikroppen i kalibratorerna, QC och
Prover kommer att konkurrera med HACE2-HRP för specifik bindning av RBD immobiliserad i brunnarna. Efter
Inkubationen, brunnarna tvättas fyra gånger för att ta bort obundet HACE2-HRP-konjugat. En lösning av
TMB tillsätts sedan och inkuberas i 20 minuter vid rumstemperatur, vilket resulterar i utvecklingen av en
blå färg. Färgutvecklingen stoppas med tillägget av 1N HCl, och absorbansen är
uppmätt spektrofotometriskt vid 450 nm. Intensiteten hos den bildade färgen är proportionell mot
Mängden enzym närvarande och är omvänt relaterad till mängden standarder som analyseras på samma sätt.
Genom jämförelse med kalibreringskurvan bildad av de medföljande kalibratorerna, koncentrationen av
Neutraliserande antikroppar i det okända provet beräknas sedan.
【Material som krävs men inte tillhandahålls】
1. Destillerat eller avjoniserat vatten
2. Precisionspipetter: 10 ul, 100 ul, 200 ul och 1 ml
3. Tips om engångspipett
4. Mikroplattläsare som kan läsa absorbans vid 450 nm.
5. Absorberande papper
6. Grafpapper
7. Vortexblandare eller motsvarande
【Provinsamling och lagring】
1. Serum- och plasmaprover som samlats in i rör som innehåller K2-EDTA kan användas för detta kit.
2. Prover bör täckas och kan förvaras i upp till 48 timmar vid 2 ° C - 8 ° C före analys.
Prover som hålls under en längre tid (upp till 6 månader) bör frysas endast en gång vid -20 ° C före analysen.
Undvik upprepade frys-t-töcykler.
PROTOKOLL
【Reagensförberedelse】
1. Alla reagens måste tas ut från kylning och får återgå till rumstemperatur före användning
(20 ° till 25 ° C). Spara alla reagens i kylskåpet snabbt efter användning.
2. Alla prover och kontroller bör virvlas före användning.
3. HACE2-HRP-lösning Förberedelse: Utspädning av HACE2-HRP-koncentrat vid 1: 51 utspädningsförhållande med utspädning
Buffert. Utspäd till exempel 100 ul HACE2-HRP-koncentrat med 5,0 ml HRP-utspädningsbuffert till
Gör en HACE2-HRP-lösning.
4. 1 × tvättlösning Förberedelse: Utspädning av 20 × tvättlösning med avjoniserat eller destillerat vatten med en
Volymförhållandet 1:19. Utspäd till exempel 20 ml 20 × tvättlösning med 380 ml avjoniserad eller
Destillerat vatten för att tillverka 400 ml 1 x tvättlösning.
【Testförfarande】
1. I separata rör, alikvot 120 ul av den beredda HACE2-HRP-lösningen.
2. Tillsätt 6 ul kalibratorer, okända prover, kvalitetskontroller i varje rör och blanda väl.
3. Överför 100 ul av varje blandning framställd i steg 2 till motsvarande mikroplattbrunnar enligt
För att förutsäga testkonfiguration.
3. Täck plattan med platttätaren och inkubera vid 37 ° C under 30 minuter.
4. Ta bort platttätaren och tvätta plattan med cirka 300 ul 1 × tvättlösning per brunn för fyra gånger.
5. Tryck på plattan på pappershandduken för att ta bort återstående vätska i brunnarna efter tvättsteg.
6. Tillsätt 100 ul TMB -lösning till varje brunn och inkubera plattan i mörker vid 20 - 25 ° C under 20 minuter.
7. Tillsätt 50 ul stopplösning till varje brunn för att stoppa reaktionen.
8. Läs absorbansen i mikroplattläsare vid 450 nm inom 10 minuter (630 nm som tillbehör är
Rekommenderas för högre precisionsprestanda).