Kit Deteksi Antibodi nétralisasi SARS-CoV-2 (ELISA)
【PRINSIP】
Kit Deteksi Antibodi nétralisasi SARS-CoV-2 dumasar kana metodologi ELISA anu kompetitif.
Ngagunakeun dimurnikeun reséptor mengikat domain (RBD), protéin tina spike virus (S) protéin jeung sél host
reséptor ACE2, tés ieu dirancang pikeun meniru interaksi nétralisasi virus-host.
Calibrators, Quality Controls, sarta sérum atawa plasma sampel anu individual dicampur ogé dina éncér
panyangga anu ngandung konjugat hACE2-HRP diasingkeun dina tabung leutik. Lajeng campuran ditransferkeun ka
sumur microplate anu ngandung fragmen RBD (RBD) rékombinan immobilized (RBD) pikeun
inkubasi. Salila inkubasi 30-menit, antibodi husus RBD dina calibrators, QC jeung
sampel bakal bersaing jeung hACE2-HRP pikeun husus mengikat RBD immobilized dina sumur. Sanggeus
inkubasi, sumur dikumbah 4 kali pikeun ngaleungitkeun unbound hACE2-HRP conjugate. Solusi tina
TMB lajeng ditambahkeun jeung inkubasi salila 20 menit dina suhu kamar, hasilna ngembangkeun a
warna biru. Ngembangkeun warna dieureunkeun kalawan tambahan 1N HCl, sarta absorbance nyaeta
diukur sacara spektrofotometri dina 450 nm. Inténsitas warna kabentuk sabanding jeung
Jumlah énzim anu aya, sareng hubungan tibalik sareng jumlah standar anu diuji ku cara anu sami.
Ngaliwatan ngabandingkeun jeung kurva calibration dibentuk ku calibrators disadiakeun, konsentrasi tina
antibodi neutralizing dina sampel kanyahoan lajeng diitung.
【BAHAN DIPERLUKAN TAPI TEU DISAYEUN】
1. Sulingan atawa deionized cai
2. Pipet presisi: 10μL, 100μL, 200μL sareng 1 ml
3. Tip pipette disposable
4. Microplate maca sanggup maca absorbance dina 450nm.
5. Kertas nyerep
6. Kertas grafik
7. Vortex mixer atawa sarimbag
【Spésimén ngumpulkeun jeung neundeun】
1. Sampel sérum sareng Plasma anu dikumpulkeun dina tabung anu ngandung K2-EDTA tiasa dianggo pikeun kit ieu.
2. Spésimén kudu ditutupan jeung bisa disimpen nepi ka 48 jam dina 2 °C - 8 °C saméméh assaying.
Spésimén anu disimpen kanggo waktos anu langkung lami (dugi ka 6 bulan) kedah beku sakali sakali dina suhu -20 °C sateuacan diuji.
Hindarkeun siklus freeze-thaw terus-terusan.
PROTOKOL
【Persiapan réagen】
1. Sadaya réagen kedah dikaluarkeun tina kulkas sareng diidinan uih deui ka suhu kamar sateuacan dianggo
(20° nepi ka 25°C). Simpen sadaya réagen dina kulkas pas saatos dianggo.
2. Sadaya sampel sarta kadali kudu vortexed saméméh pamakéan.
3. Persiapan Solusi hACE2-HRP: Éncér konsentrasi hACE2-HRP dina nisbah éncér 1: 51 sareng éncér
panyangga. Contona, éncér 100 μL konsentrat hACE2-HRP sareng 5.0mL HRP Dilution Buffer ka
nyieun solusi hACE2-HRP.
4. 1× Nyeuseuh Solusi Persiapan: éncér 20 × Nyeuseuh Solusi jeung cai deionized atawa sulingan kalawan a
babandingan volume 1:19. Contona, éncér 20 mL of 20× Wash Solution jeung 380 mL deionized atawa
cai sulingan pikeun nyieun 400 ml 1 × Nyeuseuh Solusi.
【Prosedur Tés】
1. Dina tabung misah, aliquot 120μL tina hACE2-HRP Solusi disiapkeun.
2. Tambahkeun 6 μL of calibrators, sampel kanyahoan, kadali kualitas dina unggal tube jeung mix ogé.
3. Mindahkeun 100μL unggal campuran disiapkeun dina hambalan 2 kana sumur microplate pakait nurutkeun
pikeun konfigurasi test predesigned.
3. Panutup piring kalawan Plate Sealer sarta incubate dina 37 ° C salila 30 menit.
4. Leupaskeun Plate Sealer jeung ngumbah piring jeung kurang leuwih 300 μL of 1 × Nyeuseuh Solusi per wellfor opat kali.
5. Ketok piring dina anduk kertas pikeun miceun residual cair dina sumur sanggeus léngkah ngumbah.
6. Tambahkeun 100 μL TMB Solution ka unggal sumur jeung inkubasi piring dina poék dina 20 - 25 ° C salila 20 menit.
7. Tambahkeun 50 μL Stop Solution ka unggal sumur pikeun ngeureunkeun réaksina.
8. Baca absorbance dina microplate maca dina 450 nm dina 10 menit (630nm salaku aksésori
dianjurkeun pikeun kinerja precision luhur).