SM-Cov-Cov-2 nétralisasi KIT.
【Prinsipna】
Sart-Cov-Cov-2 neutralzing KIT pencegahan antibodik dumasar kana metodologi Elisa.
Nganggo domain mingpin préparasi (RBD), protéin ti Spike Viral (s) sareng sél host
Represi AGOK2, ujian ieu dirancang pikeun nyusun produk virus-kauntungan interraksi nétralisasi.
Kalibrator, kadali kualitas, sareng sérum atanapi sampel plasma anu dicampur pisan dina éncér
Buffer ngandung hacer2-HRP conjugate aliried dina tabung leutik. Maka mixer dianteurkeun di
sumur microPlate ngandung semprot sardebinan anu teu sopan-2 rbd 2 (rbd) pikeun
inwubasi Salila inkubasi 30 menit, antibodi khusus RBD di kalibrator, Qc sareng
Sample anu bakal bersaing sareng hac2-hrP pikeun ngari beungkeutan anu khusus anu henteu dirawat di sumur. Saatos
Insiutna, sumebar ditumbah 4 kali pikeun ngahapus hacez2-hRP elug mapugugate. Solusi tina
TMB teras tambah sareng diadegkeun 20 menit dina suhu kamar, hasilna pangwangunan a
warna biru. Pangembangan warna dieureunkeun kalayan ditambah 1N HCl, sareng nyerep
diukur spéktrofotomically dina 450 nm. Inténsitas warna anu dibentuk mangrupikeun saimbang sareng
Jumlah énzim sanésna, sareng ditujukeun kana jumlah standar standar diciptakeun ku cara anu sami.
Ngalangkungan ngabandingkeun sareng kurva calibration dibentuk ku kalibator anu disayogikeun, konsentrasi
Antibodies nétralisasi dina conto anu teu dipikanyaho teras diitung.
【Bahan anu dibutuhkeun tapi henteu disayogikeun】
1. Cai sulingan atanapi duka
2. Papetes precetes: 10μl, 100μL, 200μl sareng 1 ml
3. Tepi pipette Pipette
4. Pamaca microPlate sanggup nyerep maca dina 450nm.
5. Kertas
6. Kertas grafik
7. Verber Vortex atanapi sami
【Koleksi sareng panyimpen】
1. Surat sampel plasma dikumpulkeun dina tabung anu ngandung K2-EDTA tiasa dianggo pikeun kit ieu.
2. Spedimens kedah dicét sareng tiasa disimpen dugi ka 48 jam di 2 ° C - 8 ° C sateuacan ka assaying.
Spesimen diayakeun waktos langkung lami (dugi ka 6 bulan) kedah beku sakali di -20 ° C sateuacan ka assay.
Hindarkeun siklus beku-beku.
Protocol
【Persiapan réagén】
1. Sadaya réagen kedah dicandak tina kulkas sareng diidinan mulang ka suhu kamar sateuacan dianggo
(20 ° ka 25 ° C). Simpen sadayana régér dina kulkas gancang saatos dianggo.
2. Sadaya conto sareng kadali kedah vortexed sateuacan dianggo.
3. Hac2-Hac2-HRP: Checkute Hac2-HRP konsentrasi tabuh 1: 51 kaluhur sareng éncér
Nekodo. Salaku conto, éncér 100 μl Hac2-HRP konsentrasi sareng 5.0ml éncér HRP pikeun
ngadamel solusi hac2-HRP.
4. 1 × ngumbah persiapan solusi: éncér 20 secut 20 és sareng cai anu suling atanapi sulingan sareng a
Rasio jilid 1:19. Salaku conto, éncér 20 ml 25 ill solusi sareng 380 ml anu dibuang atanapi
Cai sulap ngadamel 400 ml tina 1 × nyeuseuh.
【Prosedur uji】
1. Dina tabung anu kapisah, aliik 120μl solusi helode anu disiapkeun.
2. Nambihan 6 μl calibator, conto anu teu dipikanyaho, kadali kualitas dina unggal tabung sareng gaul ogé.
3. Mindahkeun 100μ
ka konfigurasi uji anu dimaksud.
3. Lengkep piring nganggo sealer sareng inubus dina 37 ° C salami 30 menit.
4. Cabut Lilar Cleper sareng ngumbah piring kalayan kurang 300 μl 1
5. Ketok piring dina anduk kertas kanggo ngahapus cairan sésa di sumur saatos ngumbah léngkah.
6. Tambihkeun 100 μl solusi TMB pikeun unggal saé sareng insubate piring di poék tab 20 - 25 ° C salami 20 menit.
7. Nambihkeun 50 μl tina Solusi pikeun unggal ogé pikeun ngeureunkeun réaksi.
8. Maca nyerep dina maca microPlatlate di 450 nm dina 10 menit (630nm salaku aksésori
disarankeun pikeun kamampuan precision anu langkung luhur).