Комплет за детекцију неутралишућих антитела САРС-ЦоВ-2 (ЕЛИСА)

Кратак опис:


Детаљи о производу

Ознаке производа

ПРИНЦИП

Комплет за детекцију неутрализујућих антитела САРС-ЦоВ-2 заснован је на компетитивној ЕЛИСА методологији.

Коришћењем пречишћеног домена за везивање рецептора (РБД), протеина из протеина вирусног шиљка (С) и ћелије домаћина

рецептор АЦЕ2, овај тест је дизајниран да опонаша интеракцију неутрализације вируса и домаћина.

Калибратори, контроле квалитета и узорци серума или плазме се појединачно добро мешају у разблажењу

пуфер који садржи хАЦЕ2-ХРП коњугат аликвот у малим епруветама. Затим се смеше пребацују унутра

јажице микроплоче које садрже имобилисани рекомбинантни САРС-ЦоВ-2 РБД фрагмент (РБД) за

инкубација. Током 30-минутне инкубације, РБД специфично антитело у калибраторима, КЦ и

узорци ће се такмичити са хАЦЕ2-ХРП за специфично везивање РБД имобилисаног у бунарима. После

током инкубације, отворе се оперу 4 пута да би се уклонио невезани хАЦЕ2-ХРП коњугат. Решење за

Затим се додаје ТМБ и инкубира 20 минута на собној температури, што резултира развојем а

плава боја. Развој боје се зауставља додатком 1Н ХЦл, а апсорбанција је

мерено спектрофотометријски на 450 нм. Интензитет формиране боје је пропорционалан

количина присутног ензима, и обрнуто је повезана са количином стандарда анализираних на исти начин.

Поређењем са калибрационом кривом коју формирају обезбеђени калибратори, концентрација од

затим се израчунавају неутрализујућа антитела у непознатом узорку.

1
2

ПОТРЕБНИ МАТЕРИЈАЛИ АЛИ НИЈЕ ОБЕЗБЕЂЕНИ

1. Дестилована или дејонизована вода

2. Прецизне пипете: 10 μЛ, 100 μЛ, 200 μЛ и 1 мЛ

3. Врхови пипета за једнократну употребу

4. Читач микроплоча способан да очита апсорпцију на 450 нм.

5. Упијајући папир

6. Грамофонски папир

7. Вртложни миксер или еквивалентан

ПРИКУПЉАЊЕ И СКЛАДИШТЕЊЕ УЗОРАКА

1. Узорци серума и плазме прикупљени у епруветама које садрже К2-ЕДТА могу се користити за овај комплет.

2. Узорци треба да буду затворени и могу се чувати до 48 сати на 2 °Ц - 8 °Ц пре анализе.

Узорке који се држе дуже (до 6 месеци) треба замрзнути само једном на -20 °Ц пре анализе.

Избегавајте поновљене циклусе замрзавања-одмрзавања.

ПРОТОКОЛ

3

Припрема реагенса

1. Сви реагенси се морају извадити из фрижидера и оставити да се врате на собну температуру пре употребе

(20° до 25°Ц). Све реагенсе чувајте у фрижидеру одмах након употребе.

2. Све узорке и контроле треба промешати пре употребе.

3. Припрема раствора хАЦЕ2-ХРП: Разблажите хАЦЕ2-ХРП концентрат у размери разблажења 1:51 са разблаживањем

Буффер. На пример, разблажите 100 μЛ хАЦЕ2-ХРП концентрата са 5,0 мЛ ХРП пуфера за разблаживање да бисте

направите раствор хАЦЕ2-ХРП.

4. Припрема 1× раствора за прање: Разблажите 20× раствор за прање дејонизованом или дестилованом водом помоћу

однос запремине 1:19. На пример, разблажите 20 мЛ 20× раствора за прање са 380 мЛ дејонизованог или

дестиловане воде да се направи 400 мЛ 1× раствора за прање.

Тест Процедуре

1. У одвојеним епруветама, аликвот од 120 μЛ припремљеног раствора хАЦЕ2-ХРП.

2. Додајте 6 μЛ калибратора, непознатих узорака, контроле квалитета у сваку епрувету и добро промешајте.

3. Пренесите 100 μЛ сваке смеше припремљене у кораку 2 у одговарајуће јажице микроплоче према

на унапред дизајнирану тест конфигурацију.

3. Покријте плочу са Плате Сеалер-ом и инкубирајте на 37°Ц 30 минута.

4. Уклоните заптивач за плоче и оперите плочу са приближно 300 μЛ 1× раствора за прање по бунарчићу четири пута.

5. Куцните тањир о папирни пешкир да бисте уклонили преосталу течност из удубљења након корака прања.

6. Додајте 100 μЛ раствора ТМБ у сваки бунар и инкубирајте плочу у мраку на 20 - 25°Ц 20 минута.

7. Додајте 50 μЛ Стоп раствора у сваки бунар да зауставите реакцију.

8. Очитајте апсорбанцију у читачу микроплочица на 450 нм у року од 10 минута (630 нм као додатак

препоручује се за веће перформансе прецизности).

Пошаљите нам своју поруку:

Пошаљите нам своју поруку:

Напишите своју поруку овде и пошаљите нам је