Комплет за детекцију неутрализирајућих антитела САРС-ЦоВ-2 (ЕЛИСА)
【НАМЕЊЕНА УПОТРЕБА】
Комплет за детекцију неутрализирајућих антитела САРС-ЦоВ-2 је компетитивни имунолошки тест повезан са ензимима (ЕЛИСА) намењен квалитативном и полу-квантитативном откривању укупних неутрализујућих антитела на САРС-ЦоВ-2 у људском серуму и плазми. Комплет за детекцију неутрализујућих антитела САРС-ЦоВ-2 може се користити као помоћ у идентификацији појединаца са адаптивним имунолошким одговором на САРС-ЦоВ-2, што указује на недавну или претходну инфекцију. Комплет за откривање неутрализирајућих антитела САРС-ЦоВ-2 не би требало да се користи за дијагнозу акутне инфекције САРС-ЦоВ-2.
【УВОД】
Инфекције коронавирусом обично изазивају реакције неутрализујућих антитела. Стопе сероконверзије код пацијената са ЦОВИД-19 су 50% и 100% 7. и 14. дана након појаве симптома, респективно. Према садашњем сазнању, одговарајуће антитело за неутрализацију вируса у крви је препознато као циљ за одређивање ефикасности антитела, а већа концентрација неутрализујућег антитела указује на већу заштитну ефикасност. Тест неутрализације смањења плака (ПРНТ) је препознат као златни стандард за откривање неутрализујућих антитела. Међутим, због своје ниске пропусности и већег захтева за операцијом, ПРНТ није практичан за серодијагностику великих размера и евалуацију вакцине. Комплет за детекцију неутрализујућих антитела САРС-ЦоВ-2 заснован је на методологији компетитивног ензимског имуносорбентног теста (ЕЛИСА), који може да открије неутрализујуће антитело у узорку крви, као и да посебно приступи нивоима концентрације ове врсте антитела.
【Тест Процедуре】
1. У одвојеним епруветама, аликвот од 120 μЛ припремљеног раствора хАЦЕ2-ХРП.
2. Додајте 6 μЛ калибратора, непознатих узорака, контроле квалитета у сваку епрувету и добро промешајте.
3. Пренесите 100 μЛ сваке смеше припремљене у кораку 2 у одговарајуће јажице микроплоче према унапред дизајнираној конфигурацији теста.
3. Покријте плочу са заптивачем за плоче и инкубирајте на 37°Ц 60 минута.
4. Уклоните заптивач за плоче и оперите плочу са приближно 300 μЛ 1× раствора за прање по отвору четири пута.
5. Куцните плочу о папирни пешкир да бисте уклонили остатке течности у бунарима након корака прања.
6. Додајте 100 μЛ раствора ТМБ у сваки бунар и инкубирајте плочу у мраку на 20 – 25°Ц 20 минута.
7. Додајте 50 μЛ Стоп раствора у сваки бунар да зауставите реакцију.
8. Очитајте апсорбанцију у читачу микроплочица на 450 нм у року од 10 минута (630 нм као додатак се препоручује за већу прецизност.
