Kit SARS-COV-2 Neutralizimi i Antitrupave të Antitrupave (ELISA)
【Parim】
Kompleti i zbulimit të antitrupave neutralizues SARS-COV-2 bazohet në metodologjinë konkurruese ELISA.
Duke përdorur domenin lidhës të receptorit të pastruar (RBD), proteina nga proteina virale (S) dhe qeliza pritëse
Receptori ACE2, ky test është krijuar për të imituar ndërveprimin neutralizues të virusit.
Kalibruesit, kontrollet e cilësisë dhe mostrat e serumit ose plazmës janë të përziera individualisht në hollim
Buffer që përmban hace2-hrp konjugate të alikuar në tuba të vegjël. Atëherë përzierjet transferohen në
puset e mikroplatit që përmbajnë fragmentin e imobilizuar rekombinant SARS-COV-2 RBD (RBD) për
inkubacioni. Gjatë inkubacionit 30-minutësh, antitrupa specifike RBD në kalibruesit, QC dhe
Mostrat do të konkurrojnë me HACE2-HRP për lidhjen specifike të RBD të imobilizuar në puse. Më pas
Inkubacioni, puset janë larë 4 herë për të hequr konjugimin e pakufizuar HACE2-HRP. Një zgjidhje e
TMB më pas shtohet dhe inkubohet për 20 minuta në temperaturën e dhomës, duke rezultuar në zhvillimin e a
ngjyra blu. Zhvillimi i ngjyrave është ndalur me shtimin e 1N HCl, dhe thithja është
i matur spektrofotometrikisht në 450 nm. Intensiteti i ngjyrës së formuar është në përpjesëtim me
Shuma e enzimës së pranishme, dhe është e lidhur në mënyrë të kundërt me sasinë e standardeve të analizuara në të njëjtën mënyrë.
Përmes krahasimit me kurbën e kalibrimit të formuar nga kalibruesit e dhënë, përqendrimi i
Më pas llogaritet antitrupat neutralizues në mostrën e panjohur.
【Materialet e kërkuara por nuk janë dhënë】
1. Uji i distiluar ose i deionizuar
2. Pipete precize: 10μL, 100 μL, 200 μL dhe 1 ml
3. Këshilla të disponueshme për pipetë
4. Lexuesi i mikroplateve i aftë për të lexuar thithjen në 450Nm.
5. Letër absorbuese
6. Letër grafike
7. Mikser Vortex ose ekuivalent
【Mbledhja dhe ruajtja e mostrave】
1. Serumi dhe mostrat e plazmës të mbledhura në tuba që përmbajnë K2-EDTA mund të përdoren për këtë komplet.
2. Shembujt duhet të kapen dhe mund të ruhen deri në 48 orë në 2 ° C - 8 ° C para se të provohen.
Mostrat e mbajtura për një kohë më të gjatë (deri në 6 muaj) duhet të ngrishin vetëm një herë në -20 ° C para provës.
Shmangni ciklet e përsëritura të ngrirjes-shkrirjes.
Protokoll
【Përgatitja e reagentit】
1. Të gjithë reagentët duhet të merren nga ftohja dhe të lejohen të kthehen në temperaturën e dhomës para përdorimit
(20 ° deri 25 ° C). Ruani të gjithë reagentët në frigorifer menjëherë pas përdorimit.
2. Të gjitha mostrat dhe kontrollet duhet të vorbullohen para përdorimit.
3. Përgatitja e zgjidhjes HACE2-HRP: Dilute HACE2-HRP Përqendrimi në raportin e hollimit 1: 51 me hollim
Tampon Për shembull, holloni 100 μl të koncentratit HACE2-HRP me 5.0ml tampon hollimi HRP në
Bëni një zgjidhje HACE2-HRP.
4. 1 × Përgatitja e zgjidhjes së larjes: holloni zgjidhjen e larjes 20 × me ujë të deionizuar ose të distiluar me një
Raporti i vëllimit prej 1:19. Për shembull, holloni 20 ml zgjidhje të larjes 20 × me 380 ml të deionizuar ose
Uji i distiluar për të bërë 400 ml zgjidhje të larjes 1 ×.
【Procedurë e provës】
1 në tuba të veçantë, aliquot 120 μl të zgjidhjes së përgatitur HACE2-HRP.
2. Shtoni 6 μl kalibrues, mostra të panjohura, kontrolle të cilësisë në secilin tub dhe përzieni mirë.
3. Transferoni 100 μl të secilës përzierje të përgatitur në hapin 2 në puset përkatëse të mikroplatit sipas
për të paracaktuar konfigurimin e testit.
3. Mbuloni pllakën me mbyllës të pllakës dhe inkuboni në 37 ° C për 30 minuta.
4. Hiqni mbyllësin e pllakës dhe lani pllakën me afërsisht 300 μl zgjidhje të larjes 1 × për pus për katër herë.
5. Takoni pllakën në peshqir letre për të hequr lëngun e mbetur në puse pas hapave të larjes.
6. Shtoni 100 μl zgjidhje TMB për secilën pus dhe inkuboni pllakën në errësirë në 20 - 25 ° C për 20 minuta.
7. Shtoni 50 μl zgjidhje ndalimi për secilën pus për të ndaluar reagimin.
8. Lexoni thithjen në lexuesin e mikroplateve në 450 nm brenda 10 minutave (630nm siç është aksesori
rekomandohet për performancë me precizion më të lartë).