Kompleti i zbulimit të antitrupave neutralizues SARS-CoV-2 (ELISA)

【PËRDORIMI I PARAQITUR】

Kompleti i zbulimit të antitrupave neutralizues SARS-CoV-2 është një analizë imunosorbente konkurruese e lidhur me enzimën (ELISA) e destinuar për zbulimin cilësor dhe gjysmë sasior të antitrupave neutralizues total ndaj SARS-CoV-2 në serumin dhe plazmën e njeriut. Kompleti i zbulimit të antitrupave neutralizues SARS-CoV-2 mund të përdoret si një ndihmë në identifikimin e individëve me një përgjigje imune adaptive ndaj SARS-CoV-2, që tregon infeksion të fundit ose të mëparshëm. Kompleti i zbulimit të antitrupave neutralizues SARS-CoV-2 nuk duhet të përdoret për të diagnostikuar infeksionin akut SARS-CoV-2.

【HYRJE】

Infeksionet e koronavirusit zakonisht nxisin përgjigje neutralizuese të antitrupave. Normat e serokonversionit në pacientët me COVID-19 janë 50% dhe 100% në ditën e 7 dhe 14 pas fillimit të simptomave, respektivisht. Sipas njohurive, antitrupat përkatës neutralizues të virusit në gjak njihet si një objektiv për përcaktimin e efikasitetit të antitrupave dhe përqendrimi më i lartë i antitrupave neutralizues tregon efikasitet më të lartë mbrojtës. Testi i Neutralizimit të Reduktimit të Pllakës (PRNT) është njohur si standardi i artë për zbulimin e antitrupave neutralizues. Megjithatë, për shkak të xhiros së ulët dhe kërkesës më të lartë për operim, PRNT nuk është praktik për serodiagnozën në shkallë të gjerë dhe vlerësimin e vaksinave. Kompleti i zbulimit të antitrupave neutralizues SARS-CoV-2 bazohet në metodologjinë e analizës imunosorbente të lidhur me enzimën konkurruese (ELISA), e cila mund të zbulojë antitrupin neutralizues në mostrën e gjakut si dhe të aksesojë posaçërisht nivelet e përqendrimit të këtij lloji të antitrupave.

 【Procedura e testimit】

1. Në tuba të veçantë, 120 μL të tretësirës së përgatitur hACE2-HRP.

2.Shtoni 6 μL kalibratorë, mostra të panjohura, kontrolle të cilësisë në çdo tub dhe përzieni mirë.

3.Transferoni 100μL të secilës përzierje të përgatitur në hapin 2 në puset përkatëse të mikropllakës sipas konfigurimit të testimit të paracaktuar.

3. Mbuloni pjatën me Plate Sealer dhe inkuboni në 37°C për 60 minuta.

4. Hiqni pllakën mbyllëse dhe lani pjatën me përafërsisht 300 μL tretësirë ​​larës 1× për pus për katër herë.

5.Trokitni pjatën në peshqir letre për të hequr lëngun e mbetur në puset pas hapave të larjes.

6. Shtoni 100 μL tretësirë ​​TMB në çdo pus dhe inkuboni pjatën në errësirë ​​në 20 – 25°C për 20 minuta.

7.Shtoni 50 μL tretësirë ​​ndaluese në çdo pus për të ndaluar reaksionin.

8. Lexoni thithjen në lexuesin e mikropllakës në 450 nm brenda 10 minutave (630 nm si aksesor rekomandohet për performancë më të saktë.