SARS-CoV-2 Fa'a'ese'ese le Antibody Detection Kit (ELISA)
【MATAUPU FAAVAE】
O le SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit e faʻavae i luga o faiga faʻatauvaga ELISA.
Fa'aaogāina o le fa'amama fa'amama fa'amaufa'ailoga (RBD), polotini mai le polotini viral spike (S) ma le sela talimalo
receptor ACE2, o lenei su'ega ua mamanuina e fa'ata'ita'i ai le feso'ota'iga fa'a'au'au fa'ama'i.
Calibrators, Quality Controls, ma serum po'o plasma fa'ata'ita'iga e fa'afefiloi lelei i le fa'afefiloi
pa'u o lo'o iai le hACE2-HRP conjugate ua fa'avasega i totonu o fa'agaau laiti.Ona tu'u lea o mea fa'afefiloi i totonu
o vaieli microplate o loʻo i ai le faʻaogaina o le SARS-CoV-2 RBD fragment (RBD) mo
incubation.I le taimi o le 30-minute incubation, o le RBD faapitoa antibody i calibrators, QC ma
fa'ata'ita'iga o le a tauva ma le hACE2-HRP mo le fa'amauina fa'apitoa o le RBD o lo'o le gaioi i totonu o vaieli.Ina ua uma
o le fa'a'oto, e fufulu fa'a 4 vaieli e aveese ai le hACE2-HRP conjugate e le'i fusia.O se fofo o
Ona fa'aopoopo lea o le TMB ma fa'asusu mo le 20 minute i le vevela o le potu, ma fa'atupuina ai le a
lanu lanumoana.Ua taofi le atinaʻeina o lanu i le faʻaopoopoga o le 1N HCl, ma o le faʻafefe o le
fua spectrophotometrically ile 450 nm.O le malosi o le lanu na faia e tutusa ma le
aofa'i ole enzyme o lo'o iai, ma e feso'ota'i fa'afeagai ma le aofa'i o tulaga fa'ata'ita'iina ile auala lava e tasi.
E ala i le faʻatusatusaina ma le calibration curve faia e calibrators saunia, le faʻatonuga o
fa'agata fa'ama'i i le fa'ata'ita'iga le iloa ona fa'atatau lea.
【O MEA E MANAOMIA AE LE TUSIA】
1. Vai fa'ama'i pe fa'a'ona
2. Pipettes sa'o: 10μL, 100μL, 200μL ma le 1 mL
3. Fautuaga paipa lafoa'i
4. Microplate faitau mafai ona faitau absorbance i le 450nm.
5. Pepa fa'afefe
6. Pepa kalafi
7. Vortex mixer pe tutusa
【FA'AOPOINA MA TE'UINA】
1. Fa'ata'ita'iga o le toto ma le Plasma o lo'o aoina i totonu o fa'agaau o lo'o iai K2-EDTA e mafai ona fa'aoga mo lenei pusa.
2. E tatau ona pupuni fa'ata'ita'iga ma e mafai ona teuina mo le 48 itula ile 2 °C - 8°C a'o le'i faia le su'ega.
O fa'ata'ita'iga o lo'o taofia mo se taimi umi (e o'o i le 6 masina) e tatau ona fa'aaisa na'o le tasi ile -20 °C a'o le'i faia le su'ega.
Aloese mai ta'amilosaga fa'a'aisa-liu fa'afia.
POLOTOCOL
【Sauniuniga Reagent】
1. E tatau ona ave'ese uma mea fa'afefete mai le pusaaisa ma fa'ataga e toe fo'i i le vevela o le potu a'o le'i fa'aogaina
(20° i le 25°C).Fa'asaoina uma mea fa'afofoga i totonu o le pusaaisa pe'a uma ona fa'aoga.
2. O faʻataʻitaʻiga uma ma faʻatonuga e tatau ona faʻafefe aʻo leʻi faʻaaogaina.
3. HACE2-HRP Fofo Sauniuniga: Fa'asuavaia le fa'amalieina o le hACE2-HRP ile 1:51 fa'asoa fa'atasi ma le fa'afefiloi.
Puipui.Mo se faʻataʻitaʻiga, faʻafefete le 100 μL o le hACE2-HRP concentrate ma le 5.0mL o le HRP Dilution Buffer i.
fai se fofo hACE2-HRP.
4. 1× Fufulu Fofo Sauniuniga: Fa'asusu le 20x Fufulu Fofo ile vai fa'a'ona po'o vai fa'amama ma se
fua faatatau voluma o 1:19.Mo se faʻataʻitaʻiga, faʻafefete le 20 mL o le 20 × Fufulu Fofo ma le 380 mL o le deionized poʻo
vai fa'amama e fai ai le 400 mL ole 1× Fufulu Fofo.
【Faiga o Su'ega】
1. I tubes eseese, aliquot 120μL o le fofo saunia hACE2-HRP.
2. Faʻaopoopo 6 μL o calibrators, faʻataʻitaʻiga le iloa, faʻatonuga lelei i totonu o paipa taʻitasi ma faʻafefiloi lelei.
3. Fa'afeiloa'i le 100μL o paluga ta'itasi ua saunia i le Laasaga 2 i totonu o vaieli microplate tutusa e tusa ai
i le fa'atulagaina o su'ega.
3. Ufiufi le ipu i le Plate Sealer ma fa'amu ile 37°C mo le 30 minute.
4. Aveese le Fa'amau Fa'amau ma fufulu le ipu pe tusa ma le 300 μL o le 1× Fufulu Fofo ile vaieli mo fa'afa.
5. Oomi le ipu i luga o le solo pepa e aveese ai le vai o totoe i vaieli pe a uma ona fufulu laasaga.
6. Fa'aopoopo le 100 μL o le TMB Solution i vaieli ta'itasi ma fa'anofo le ipu i le pogisa ile 20 - 25°C mo le 20 minute.
7. Fa'aopoopo le 50 μL o le Taofi Fofo i vaieli ta'itasi e taofi ai le tali.
8. Faitau le miti i totonu o le microplate reader i le 450 nm i totonu ole 10 minute (630nm e pei o se mea faaopoopo
fautuaina mo le maualuga maualuga o le faʻatinoga).
