Komplet za odkrivanje nevtralizirajočih protiteles SARS-CoV-2 (ELISA)
【NAMEN UPORABE】
Komplet za odkrivanje nevtralizirajočih protiteles SARS-CoV-2 je konkurenčni encimski imunosorbentni test (ELISA), namenjen kvalitativnemu in polkvantitativnemu odkrivanju skupnih nevtralizirajočih protiteles proti SARS-CoV-2 v človeškem serumu in plazmi. Komplet za odkrivanje nevtralizirajočih protiteles SARS-CoV-2 se lahko uporablja kot pomoč pri prepoznavanju posameznikov s prilagodljivim imunskim odzivom na SARS-CoV-2, kar kaže na nedavno ali predhodno okužbo. Kompleta za odkrivanje nevtralizirajočih protiteles SARS-CoV-2 se ne sme uporabljati za diagnosticiranje akutne okužbe s SARS-CoV-2.
【UVOD】
Okužbe s koronavirusom običajno povzročijo odzive nevtralizirajočih protiteles. Stopnje serokonverzije pri bolnikih s COVID-19 so 50 % oziroma 100 % 7. oziroma 14. dan po pojavu simptomov. Glede na znanje je ustrezna protitelesa za nevtralizacijo virusa v krvi prepoznana kot tarča za določanje učinkovitosti protiteles in višja koncentracija protiteles za nevtralizacijo kaže na večjo učinkovitost zaščite. Plaque Reduction Neutralization Test (PRNT) je priznan kot zlati standard za odkrivanje nevtralizirajočih protiteles. Vendar PRNT zaradi nizke zmogljivosti in večjih zahtev za delovanje ni praktičen za obsežno serodiagnozo in oceno cepiva. Komplet za odkrivanje nevtralizirajočih protiteles SARS-CoV-2 temelji na metodologiji konkurenčnega encimsko vezanega imunskega testa (ELISA), ki lahko zazna nevtralizirajoča protitelesa v vzorcu krvi in posebej dostopa do ravni koncentracije te vrste protiteles.
【Testni postopek】
1. V ločene epruvete alikvotirajte 120 μL pripravljene raztopine hACE2-HRP.
2. V vsako epruveto dodajte 6 μL kalibratorjev, neznanih vzorcev, kontrol kakovosti in dobro premešajte.
3. Prenesite 100 μL vsake zmesi, pripravljene v 2. koraku, v ustrezne vdolbinice mikroplošče v skladu z vnaprej načrtovano preskusno konfiguracijo.
3. Ploščo pokrijte s tesnilom za plošče in inkubirajte 60 minut pri 37 °C.
4. Odstranite tesnilo za ploščo in štirikrat sperite ploščo s približno 300 μL 1 × raztopine za izpiranje na vdolbino.
5. Ploščo potrkajte po papirnati brisači, da odstranite ostanke tekočine v vdolbinicah po korakih pranja.
6. Dodajte 100 μL raztopine TMB v vsako vdolbinico in ploščo inkubirajte 20 minut v temi pri 20 – 25 °C.
7. V vsako vdolbinico dodajte 50 μL raztopine za zaustavitev, da ustavite reakcijo.
8. V 10 minutah odčitajte absorbanco v bralniku mikroplošč pri 450 nm (za večjo natančnost je priporočljivo 630 nm kot dodatek.
