SARS-CoV-2 Nevtralizirajoči komplet za odkrivanje protiteles （ELISA)
【Predvidena uporaba】
SARS-Cov-2 Nevtralizirajoči komplet za odkrivanje protiteles je tekmovalni encimski imunosorbent test (ELISA), namenjen kvalitativnemu in polkvantitativnemu odkrivanju skupnih nevtralizirajočih protiteles na SARS-CoV-2 v človeškem serumu in plazmi. Komplet za odkrivanje protiteles SARS-COV-2 se lahko uporabi kot pomoč pri prepoznavanju posameznikov s prilagodljivim imunskim odzivom na SARS-COV-2, kar kaže na nedavno ali predhodno okužbo. SARS-Cov-2 nevtralizacijski komplet za odkrivanje protiteles ne bi smeli uporabljati za diagnosticiranje akutne okužbe SARS-Cov-2.
【Uvod】
Koronavirusne okužbe običajno povzročajo nevtralizirajoče odzive protiteles. Stopnje serokonverzije pri bolnikih s COVID-19 so 50% in 100% na 7. in 14. dan po pojavu simptomov. Za predstavitev znanja je ustrezna protitelesa, ki nevtralizira virus v krvi, prepoznana kot tarča za določanje učinkovitosti protiteles, večja koncentracija nevtralizirajočega protitelesa pa kaže na večjo učinkovitost zaščite. Preskus zmanjšanja nevtralizacije plakov (PRNT) je bil prepoznan kot zlati standard za odkrivanje nevtralizacijskih protiteles. Vendar pa zaradi nizke pretočne in večje potrebe po delovanju PRNT ni praktičen za obsežno serodiagnozo in oceno cepiva. Komplet za odkrivanje protiteles SARS-Cov-2 temelji na konkurenčni metodologiji imunosorbentnega testa (ELISA), ki je povezan s konkurenčnim encimom, ki lahko odkrije nevtralizirajoče protitelesa v vzorcu krvi in posebej dostopa do koncentracije tovrstnih protiteles.
【Preskusni postopek】
1. V ločenih ceveh, alikvotu 120 μl pripravljene raztopine HACE2-HRP.
2. Dodajte 6 μl kalibratorjev, neznanih vzorcev, nadzor kakovosti v vsaki cevi in dobro premešajte.
3. Preverite 100 μl vsake mešanice, pripravljene v koraku 2, v ustrezne mikroplastne vrtine v skladu z vnaprej zasnovano preskusno konfiguracijo.
3. Plošče prekrijte s tesnilnim materialom in 60 minut inkubirajte pri 37 ° C.
4. Štirikrat odstranjujte tesnilno ploščo in ploščo s približno 300 μl 1 × raztopine 1 × na vrtino.
5. Plošče pritrdite na papirnato brisačo, da po korakih pranja odstranite preostalo tekočino v vrtinah.
6. Dodajte 100 μl raztopine TMB za vsako vrtino in ploščo inkubirajte v temi pri 20 - 25 ° C 20 minut.
7. dodajte 50 μl raztopine za zaustavitev vsake vrtine, da zaustavite reakcijo.
8. V 10 minutah (630nm, saj se priporoča dodatna oprema, je za večjo natančnost prebral absorbanco v čitalniku mikroplat pri 450 nm.
