Súprava na detekciu neutralizačných protilátok SARS-CoV-2 (ELISA)
【URČENÉ POUŽITIE】
SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit je kompetitívny enzýmový imunosorbentný test (ELISA) určený na kvalitatívnu a semikvantitatívnu detekciu celkových neutralizujúcich protilátok proti SARS-CoV-2 v ľudskom sére a plazme. Súpravu na detekciu SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit možno použiť ako pomôcku pri identifikácii jedincov s adaptívnou imunitnou odpoveďou na SARS-CoV-2, čo naznačuje nedávnu alebo predchádzajúcu infekciu. Súprava na detekciu neutralizačných protilátok SARS-CoV-2 by sa nemala používať na diagnostiku akútnej infekcie SARS-CoV-2.
【ÚVOD】
Koronavírusové infekcie typicky vyvolávajú neutralizačné protilátkové reakcie. Miera sérokonverzie u pacientov s COVID-19 je 50 % a 100 % na 7. deň a 14. deň po nástupe symptómov. Podľa súčasných poznatkov je zodpovedajúca protilátka neutralizujúca vírus v krvi uznávaná ako cieľ na stanovenie účinnosti protilátky a vyššia koncentrácia neutralizačnej protilátky naznačuje vyššiu účinnosť ochrany. Plaque Reduction Neutralization Test (PRNT) je uznávaný ako zlatý štandard na detekciu neutralizujúcich protilátok. Avšak vzhľadom na nízku priepustnosť a vyššie požiadavky na prevádzku nie je PRNT praktický na sérodiagnostiku a hodnotenie vakcín vo veľkom meradle. Súprava na detekciu neutralizačných protilátok SARS-CoV-2 je založená na metodológii ELISA (Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), ktorá dokáže detegovať neutralizačné protilátky vo vzorke krvi, ako aj špeciálne získať prístup k hladinám koncentrácie tohto typu protilátky.
【Postup testu】
1.V oddelených skúmavkách alikvotne nalejte 120 μl pripraveného roztoku hACE2-HRP.
2. Do každej skúmavky pridajte 6 μl kalibrátorov, neznámych vzoriek, kontroly kvality a dobre premiešajte.
3. Preneste 100 μl každej zmesi pripravenej v kroku 2 do príslušných jamiek mikroplatničky podľa vopred navrhnutej testovacej konfigurácie.
3. Platničku prikryte utesňovačom platní a inkubujte pri teplote 37 °C počas 60 minút.
4. Odstráňte tesniacu vrstvu platne a platňu štyrikrát premyte približne 300 μl 1× premývacieho roztoku na jamku.
5. Poklepaním doštičky po papierovej utierke sa odstráni zvyšková tekutina v jamkách po premývacích krokoch.
6. Pridajte 100 μl roztoku TMB do každej jamky a doštičku inkubujte v tme pri teplote 20 – 25 °C počas 20 minút.
7. Na zastavenie reakcie pridajte 50 μl zastavovacieho roztoku do každej jamky.
8. Odčítajte absorbanciu na čítačke mikrodoštičiek pri 450 nm do 10 minút (pre vyššiu presnosť sa odporúča 630 nm ako príslušenstvo).
