Súprava na detekciu nukleových kyselín vírusu opičích kiahní (MPV).

Súprava obsahuje činidlá na spracovanie 48 testov alebo kontrolu kvality vrátane nasledujúcich komponentov:

Činidlo A

ČinidloB

Poznámka: Komponenty s rôznymi číslami šarží nie je možné zameniť

【Podmienky skladovania a trvanlivosť】

1. Činidlo A/B možno skladovať pri 2-30°C a skladovateľnosť je 10 mesiacov.

2. Kryt skúmavky otvorte len vtedy, keď ste pripravení na test.

3. Nepoužívajte skúmavky po dátume exspirácie.

4. Nepoužívajte hadičku na detekciu netesnosti.

【Použiteľný nástroj】

Vhodné pre Vhodné pre LC480 PCR analytický systém, Gentier 48E automatický PCR analytický systém, ABI7500 PCR analytický systém.

【Vzorové požiadavky】

1. Použiteľné typy vzoriek: vzorky výterov z hrdla.

2. Roztok na odber vzoriek:Po overení sa odporúča použiť na odber vzoriek normálny fyziologický roztok alebo skúmavku na uchovávanie vírusov vyrábanú spoločnosťou Hangzhou Testsea biology.

výter z hrdla:utrite obojstranné hltanové mandle a zadnú faryngálnu stenu jednorazovým sterilným vzorkovacím tampónom, ponorte tampón do skúmavky obsahujúcej 3 ml vzorkovacieho roztoku, zlikvidujte chvost a utiahnite kryt skúmavky.

3. Skladovanie a dodanie vzorky:Vzorky, ktoré sa majú testovať, by sa mali testovať čo najskôr.Prepravná teplota by sa mala udržiavať na 2 ~ 8 °C. Vzorky, ktoré je možné testovať do 24 hodín, možno skladovať pri teplote 2 °C ~ 8 °C a ak vzorky nemožno testovať do 24 hodín, mali by sa skladovať pri teplote nižšej alebo rovnakej do -70 ℃ (ak nie sú skladovacie podmienky -70 ℃, môže sa dočasne skladovať pri -20 ℃), vyhnite sa opakovaniu

mrazenie a rozmrazovanie.

4. Správny odber vzoriek, skladovanie a preprava sú rozhodujúce pre výkon tohto produktu.

【Testovacia metóda】

1. Spracovanie vzoriek a pridávanie vzoriek

1.1 Spracovanie vzorky

Po zmiešaní vyššie uvedeného vzorkovacieho roztoku so vzorkami odoberte 30 μl vzorky do skúmavky na uvoľňovanie DNA a rovnomerne ju premiešajte.

1.2 Načítanie

Vezmite 20 μl rekonštitučného činidla a pridajte ho do detekčného činidla MPV, pridajte 5 μl vyššie spracovanej vzorky (Pozitívna kontrola a negatívna kontrola sa spracujú súbežne so vzorkami), prikryte uzáver skúmavky, centrifugujte pri 2000 ot./min. sekúnd.

2. PCR amplifikácia

2.1 Vložte pripravenú PCR platňu/skúmavky do fluorescenčného prístroja PCR, pre každý test sa nastaví negatívna kontrola a pozitívna kontrola.

2.2 Nastavenie fluorescenčného kanála：

1)Vyberte kanál FAM pre detekciu MPV；

2) Zvoľte HEX/VIC kanál na detekciu interného kontrolného génu；

3. Analýza výsledkov

Nastavte základnú čiaru nad najvyšší bod fluorescenčnej krivky negatívnej kontroly.

4. Kontrola kvality

4.1 Negatívna kontrola：Žiadna hodnota Ct zistená v kanáli FAM, HEX/VIC alebo Ct＞40；

4.2 Pozitívna kontrola: V kanáli FAM、HEX/VIC, Ct≤40;

4.3 Vyššie uvedené požiadavky by mali byť splnené v rovnakom experimente, inak sú výsledky testu neplatné a experiment je potrebné zopakovať.

【Medzná hodnota】

Vzorka sa považuje za pozitívnu, keď: Ct≤40 cieľovej sekvencie, Ct≤40 génu vnútornej kontroly.

【Interpretácia výsledkov】

Keď prejde kontrolou kvality, používatelia by mali skontrolovať, či existuje amplifikačná krivka pre každú vzorku v HEX/VIC kanáli, ak existuje a má Ct≤40, znamená to, že interný kontrolný gén je úspešne amplifikovaný a tento konkrétny test je platný.Používatelia môžu prejsť na následnú analýzu:

3. Pri vzorkách, u ktorých zlyhala amplifikácia interného kontrolného génu (HEX/VIC

kanál, Ct＞40 alebo žiadna amplifikačná krivka), príčinou zlyhania môže byť nízka vírusová záťaž alebo existencia inhibítora PCR, treba vyšetrenie zopakovať z odberu vzorky;

4. V prípade pozitívnych vzoriek a kultivovaného vírusu výsledky internej kontroly neovplyvňujú;

V prípade negatívnych vzoriek musí byť vnútorná kontrola testovaná ako pozitívna, inak je celkový výsledok neplatný a vyšetrenie je potrebné zopakovať, počnúc krokom odberu vzorky