සර්ස්-කෝව් -2 ප්රතිදේහ හඳුනාගැනීමේ කට්ටලය උදාසීන කිරීම (elisa)
【මූලධර්මය】
ඇන්ටිබෝඩි හඳුනාගැනීමේ කට්ටලය උදාසීන කිරීම තරඟකාරී ELISA ක්රමවේදය මත පදනම්ව සාර්ස්-කෝව් -2 වේ.
වෛරස් ස්පයික් (ය) ප්රෝටීන් සහ ධාරක කොටුවෙන් පිරිසිදු කරන ලද ප්රතිග්රාහක බන්ධන බන්ධන බන්ධන බන්ධන බන්ධන බන්ධන බන්ධන බන්ධනය (RBD) භාවිතා කිරීම
ප්රතිග්රාහක ACE2, මෙම පරීක්ෂණය සැලසුම් කර ඇත්තේ වෛරස් සත්කාරකත්වය උදාසීන කිරීම අන්තර්ක්රියාකාරිත්වය අනුකරණය කිරීම සඳහා ය.
ක්රමාංකන්, තත්ත්ව පාලනයන් සහ සෙරුමය හෝ ප්ලාස්මා සාම්පල තනුක කිරීම සඳහා තනි තනිව මිශ්ර කර ඇත
කුඩා නලවල ඇක්ස් 2-එච්ආර්පී සංචිතයක් අඩංගු බෆරය. එවිට මිශ්රණ මාරු කරනු ලැබේ
නිශ්චල නැවත කියවීම නැවත සංයුක්ත සෝර්ට්ස්-කෝව් -2 ආර්බීඩී කැබැල්ලක් (RBD) අඩංගු මයික්රොපෝට් වේ
පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරු කිරීම. මිනිත්තු 30 ක පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරු කාලය තුළ, ක්රමාංකකයන්, QC සහ RBD විශේෂිත ප්රතිදේහය
ළිංවල නිශ්චල වූ RBD විශේෂිත බන්ධනය සඳහා සාම්පල HECE2-HRP සමඟ තරඟ කරයි. පසුව
අනාරක්ෂිත HRP 2-HRP සංයුක්ත ඉවත් කිරීම සඳහා පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරු කිරීම, ළිං 4 වතාවක් සෝදා හරිනු ලැබේ. විසඳුමක්
ඉන්පසු TMB පසුව එකතු කර කාමර උෂ්ණත්වයේ මිනිත්තු 20 ක් සඳහා පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරු කර ඇති අතර එහි ප්රති ing ලයක් ලෙස අ
නිල් පැහැය. 1N HCL එකතු කිරීමත් සමඟ වර්ණ සංවර්ධනය නතර වී ඇති අතර අවශෝෂණය වේ
450 nm හි වර්ණාවලීක්ෂය මනාව මනින ලදී. සෑදී ඇති වර්ණයේ තීව්රතාවය එයට සමානුපාතික වේ
දැනට පවතින එන්සයිම ප්රමාණය, සහ ඒ හා සමානව තක්සේරු කළ ප්රමිතීන් ප්රමාණයට ප්රතිලෝමව සම්බන්ධ වේ.
සපයන ලද ක්රමාංකන යන්ත්ර මගින් ඇති වූ ක්රමාංකන වක්රය හා සැසඳීමෙන්, සාන්ද්රණය
නොදන්නා නියැදියේ ප්රතිදේහ උදාසීන කිරීම පසුව ගණනය කරනු ලැබේ.
【අවශ්ය ද්රව්ය නමුත් සපයා නැත】
1. ආසවනය කළ හෝ ඩියෝනි කරන ලද ජලය
2. නිරවද්ය නලෙට්ස්: 10μl, 100μl, 200μL, 200μL සහ 1 ML
3. ඉවත දැමිය හැකි පයිප්ප ඉඟි
4. සක්රීය කොටළුවා පා er කයා 450nm ට අවශෝෂණය කරගත හැකිය.
5. අවශෝෂක කඩදාසි
6. ප්රස්ථාර කඩදාසි
7. වෝටර්ස් මික්සර් හෝ ඊට සමාන
【නිදර්ශක එකතු කිරීම සහ ගබඩා කිරීම】
1. කේ 2-එඩ්ටා අඩංගු නලවල එකතු කරන ලද සෙරුමය සහ ප්ලාස්මා සාම්පල මෙම කට්ටලය සඳහා භාවිතා කළ හැකිය.
2. නිදර්ශක ආවරණය කළ යුතු අතර, තක්සේරු කිරීමට පෙර පැය 48 ක් දක්වා පැය 48 ක් දක්වා ගබඩා කළ හැකිය.
දිගු කාලයක් (මාස 6 දක්වා) දක්වා ඇති නිදර්ශක, තක්සේo කිරීමට පෙර -20 ° C එක් වරක් පමණක් ශීත කළ යුතුය.
නැවත නැවත කැටි-දියවන චක්ර කිරීමෙන් වළකින්න.
ප්රොටෝකෝලය
【නැවත සකස් කිරීම】
1. සියලුම ප්රතිකීර්තයින් භාවිතා කිරීමට පෙර නැවත ධාවනය කර නැවත කාමර උෂ්ණත්වයට ආපසු යාමට ඉඩ දිය යුතුය
(20 ° සිට 25 ° C). භාවිතා කිරීමෙන් පසු වහාම ශීතකරණය තුළ ඇති සියලුම ප්රතික්රියාකාරක ඉක්මනින් සුරකින්න.
2. සියලු සාම්පල සහ පාලනයන් භාවිතයට පෙර සුළි සුළඟ විය යුතුය.
3. Hece2-HRP විසඳුම සකස් කිරීම: හේස් 2-එච්ආර්පී සාන්ද්රණය 1: 51 තනුක අනුපාතය තනුක කිරීම
බෆරය. උදාහරණයක් ලෙස, HRP 2 (0 එම්.ආර්.පී.
HECE2-HRP විසඳුමක් සාදන්න.
4. 1 × සෝදන ද්රාවණය සකස් කිරීම: ඩයියෝනිංගීකරණය හෝ ආසවනය කළ ජලය සමඟ 20 × සේදීමේ විසඳුම තනුක කරන්න a
1:19 පරිමාව අනුපාතය. නිදසුනක් ලෙස, ඩියෝනිස්ට් මිලි ලීටර් 380 ක් සමඟ × සෙවීමේ ද්රාවණය 20 × සෝදන්න
1 × සේදීමේ ද්රාවණයක මිලි ලීටර් 400 මිලි ලීටර් 400 ක් සෑදීම සඳහා ආසවනය කළ ජලය.
【පරීක්ෂණ ක්රියා පටිපාටිය】
1. වෙනම නල වලදී, සූදානම් කළ HECE2-HRP විසඳුමෙන් 120μL.
2. ක්රමාංකකයන්, නොදන්නා සාම්පල, එක් එක් නළයේ ගුණාත්මක පාලනයන් සහ හොඳින් මිශ්ර කර හොඳින් මිශ්ර කරන්න.
3. පියවර 2 හි සකස් කරන ලද එක් එක් මිශ්රණයක් සඳහා 1005l හුවමාරුවෙන් අනුරූප මයික්රොට් කොටුව දක්වා මාරු කරන්න
කලින් සැලසුම් වින්යාසය වෙත.
3. තහඩුව තහඩු සීලර් සමඟ තහඩුව ආවරණය කර විනාඩි 30 ක් 37 ° C.
4. සිව්වන වතාවකට සිව් වතාවක් 1 × සෝදන ද්රාවණයකට ආසන්න වශයෙන් තහඩුව සේදීම සහ තහඩුව සෝදන්න.
5. ළිං සෝදිසියෙන් පසු වෙල්ඩ්ස් වල අවශේෂ දියර ඉවත් කිරීම සඳහා කඩදාසි තුවා මත තහඩුව තට්ටු කරන්න.
6. සෑම ළිඳකටම TMB ද්රාවණයේ 100 μL 100 μL එකතු කර විනාඩි 20 ක් 20 - 25 ° C දී අඳුරේ පුරවා තබන්න.
7. ප්රතික්රියාව නැවැත්වීම සඳහා නැවතුම් විසඳුමේ 50 μl 50 μL එකතු කරන්න.
8. මයික්රොපෝට් රචනයේ අවශෝෂණය කරන්න 450 nm මිනිත්තු 10 ක් ඇතුළත මිනිත්තු 10 ක් (630)
ඉහළ නිරවද්ය කාර්ය සාධනයක් සඳහා නිර්දේශ කෙරේ).