SARS-CoV-2 උදාසීන ප්රතිදේහ හඳුනාගැනීමේ කට්ටලය (ELISA)

【භාවිතා කිරීමට අදහස් කෙරේ】

SARS-CoV-2 උදාසීන ප්‍රතිදේහ හඳුනාගැනීමේ කට්ටලය යනු තරඟකාරී එන්සයිම-සම්බන්ධිත ප්‍රතිශක්තිකරණ විශ්ලේෂණය (ELISA) යනු මිනිස් සෙරුමය සහ ප්ලාස්මා තුළ ඇති SARS-CoV-2 සඳහා සම්පූර්ණ උදාසීන ප්‍රතිදේහ ගුණාත්මක හා අර්ධ ප්‍රමාණාත්මකව හඳුනා ගැනීම සඳහා අදහස් කෙරේ. SARS-CoV-2 උදාසීන ප්‍රතිදේහ හඳුනාගැනීමේ කට්ටලය SARS-CoV-2 සඳහා අනුවර්තනය වන ප්‍රතිශක්තිකරණ ප්‍රතිචාරයක් ඇති පුද්ගලයින් හඳුනාගැනීමේ ආධාරයක් ලෙස භාවිතා කළ හැක, එය මෑතකාලීන හෝ පෙර ආසාදනයක් පෙන්නුම් කරයි. උග්‍ර SARS-CoV-2 ආසාදනය හඳුනා ගැනීමට SARS-CoV-2 උදාසීන ප්‍රතිදේහ හඳුනාගැනීමේ කට්ටලය භාවිතා නොකළ යුතුය.

【හැඳින්වීම】

කොරෝනා වයිරස් ආසාදන සාමාන්‍යයෙන් උදාසීන ප්‍රතිදේහ ප්‍රතිචාර ඇති කරයි. COVID-19 රෝගීන්ගේ seroconversion අනුපාතය පිළිවෙළින් 50% සහ 100% දින 7 සහ 14 පශ්චාත් රෝග ලක්ෂණ ආරම්භ වේ. දැනුම ඉදිරිපත් කිරීම සඳහා, රුධිරයේ ඇති අනුරූප වෛරස් උදාසීන ප්‍රතිදේහ ප්‍රතිදේහ කාර්යක්ෂමතාව තීරණය කිරීමේ ඉලක්කයක් ලෙස හඳුනාගෙන ඇති අතර උදාසීන ප්‍රතිදේහයේ ඉහළ සාන්ද්‍රණය ඉහළ ආරක්ෂණ කාර්යක්ෂමතාව පෙන්නුම් කරයි. ප්ලේක් අඩු කිරීමේ උදාසීනකරණ පරීක්ෂණය (PRNT) උදාසීන ප්‍රතිදේහ හඳුනාගැනීමේ රන් ප්‍රමිතිය ලෙස පිළිගෙන ඇත. කෙසේ වෙතත්, එහි අඩු ප්‍රතිදානය සහ ක්‍රියාකාරිත්වය සඳහා ඉහළ අවශ්‍යතාවය හේතුවෙන්, මහා පරිමාණ සෙරෝඩියාග්‍නොසිස් සහ එන්නත් ඇගයීම සඳහා PRNT ප්‍රායෝගික නොවේ. SARS-CoV-2 උදාසීන ප්‍රතිදේහ හඳුනාගැනීමේ කට්ටලය පදනම් වී ඇත්තේ තරඟකාරී එන්සයිම-සම්බන්ධිත ප්‍රතිශක්තිකරණ විශ්ලේෂණය (ELISA) ක්‍රමවේදය මත වන අතර එමඟින් රුධිර සාම්පලයේ උදාසීන ප්‍රතිදේහ හඳුනා ගැනීමට මෙන්ම මෙම වර්ගයේ ප්‍රතිදේහවල සාන්ද්‍රණ මට්ටම්වලට විශේෂයෙන් ප්‍රවේශ විය හැකිය.

 【පරීක්ෂණ ක්රියා පටිපාටිය】

1.වෙනම නල වල, සකස් කළ hACE2-HRP විසඳුමෙන් aliquot 120μL.

2.එක් එක් නලයට ක්‍රමාංකන 6 μL, නොදන්නා සාම්පල, තත්ත්ව පාලන එකතු කර හොඳින් මිශ්‍ර කරන්න.

3.පෙර සැලසුම් කරන ලද පරීක්ෂණ වින්‍යාසය අනුව පියවර 2 හි සකස් කරන ලද එක් එක් මිශ්‍රණයෙන් 100μL අනුරූප මයික්‍රොප්ලේට් ළිං වෙත මාරු කරන්න.

3.ප්ලේට් සීලර් එකකින් තහඩුව ආවරණය කර 37°C උෂ්ණත්වයේ විනාඩි 60ක් පුර්වාගත කරන්න.

4.ප්ලේට් සීලර් ඉවත් කර ළිඳකට දළ වශයෙන් 300 μL 1× වොෂ් ද්‍රාවණයකින් පිඟාන හතර වතාවක් සෝදන්න.

5. සේදීමේ පියවරෙන් පසු ළිංවල අවශේෂ දියර ඉවත් කිරීමට කඩදාසි තුවා මත තහඩුව තට්ටු කරන්න.

6.එක් එක් ළිඳට TMB ද්‍රාවණය 100 μL එකතු කර විනාඩි 20ක් සඳහා තහඩුව 20 - 25°C අඳුරේ පුර්වාගත කරන්න.

7.ප්‍රතික්‍රියාව නැවැත්වීම සඳහා සෑම ළිඳකටම Stop Solution 50 μL එක් කරන්න.

8. මිනිත්තු 10ක් ඇතුළත මයික්‍රොප්ලේට් රීඩරයේ 450 nm හි අවශෝෂණය කියවන්න (උපරිමයක් ලෙස 630nm ඉහළ නිරවද්‍ය කාර්ය සාධනයක් සඳහා නිර්දේශ කෙරේ.