SARRS-COV-2 اينٽي بايوڊ ڊڪشنري کٽ (ايلسا)
【اصول】
SARR-COV-2 غير جانبدار اينٽي بايوڊيوٽڪ ايٽمينٽ کٽ مقابلي واري ايلسا طريقي سان ٻڌل آهي.
VERL SPICKION (RBD) استعمال ڪندي وائرل اسپائڪ (آر بي ڊي) وائرل اسپيڪ (آر) پروٽين ۽ ميزبان سيل مان پروٽين
ريڪارڊ ACE2، اهو ٽيسٽ وائرس جي ميزبان کي غير جانبدار گفتگو کي نقل ڪرڻ لاء ڊزائين ڪيو ويو آهي.
ڪيليبرز، معيار جا ڪنٽرول، ۽ سيرم يا پلازما جا نمونا انفرادي طور تي مرض ۾ چ well ي طرح ملائي رهيا آهن
بفر تي مشتمل آهي هاس 2-HRP CUNGAGE اڻايل نن t ن ٽيوب ۾. پوء ملاحن ۾ منتقل ڪيا ويا آهن
مائڪروپليٽ ويلز شامل آهن امربيل ريبامينٽ ايس آر ايس-COV-2 RBBD ٽڪڙ (آر بي ڊي) لاء
انڪشاف. 30 منٽن جي انبريشن دوران، ڪيليبرٽرز ۾ آر بي ڊي مخصوص اين سي بي ڊي ۽
نمونن جي مقابلي ۾ فيڪٽ 2-HRP سان مقابلو ڪيو ويو آهي آر بي ڊي کي ويلز ۾ بي مقصد آهي. کان پوء
انڪشاف، انبائونڊ هاسپ ڪنگيوٽ کي ختم ڪرڻ لاء ويلز 4 ڀيرا ڌوئيا ويندا آهن. جو حل
TMB پوء شامل ڪيو ويو آهي ۽ 20 منٽن تي ڪمري جي حرارت تي، نتيجي ۾ هڪ جي ترقي جي نتيجي ۾
نيري رنگ. رنگ جي ترقي 1n hcc جي اضافي سان روڪي وئي آهي، ۽ جذب ڪندڙ آهي
450 nm تي اسپيڪروپوٽوٽڪڪ طور تي ماپي. رنگ جي شدت جو تناسب آهي متناسب
اينزيم جو مقدار موجود آهي، ۽ هڪ ئي طريقي سان معيارن جي مقدار جي مقدار سان جڙيل آهي.
ڪيل ڪيليبگرز طرفان ٺهيل ڪيليشين وکر جي مقابلي ذريعي، تسلسل جي توجه
نامعلوم نموني ۾ اينٽي بائيوڊز کي غير جانبدار ڪرڻ جو حساب ڪيو ويندو آهي.
【مواد گهربل آهي پر مهيا نه ڪيو ويو آهي】
1. ويندڙ يا ڊيزيل پاڻي
2. درستگي جو پائليٽ: 10μl، 100μl، 200μl، 200μl ۽ 1 ايم ايل
3. ڊسپوزيبل پائليٽ جون صلاحون
4. مائڪروپليٽ ريڊر 450nm تي جذبات پڙهڻ جي قابل.
5. جاذب ڪاغذ
6. گراف پيپر
7. وراثت ميڪسير يا برابر
【نمونن جو مجموعو ۽ ذخيرو】
1. سيرم ۽ پلازما جا نمونا نلين ۾ گڏ ڪيل نلين ۾ گڏ ڪري سگھن ٿا.
2. نمونو لازمي هجڻ گهرجي ۽ شايد 48 ڪلاڪن تائين جمع ٿيڻ لاء 48 ڪلاڪن تائين محفوظ ڪيو وڃي.
هڪ ڊگهي وقت تائين هڪ ڊگهي وقت تائين (6 مهينن تائين) هڪ ڀيرو اڳ ۾ ئي هڪ ڀيرو -20 ° C تي منجهيل هجڻ گهرجي.
بار بار فرائيز ٿلهي چڪر کان پاسو ڪريو.
پروٽوڪول
【ريجيڪٽ تيار ڪرڻ】
1. سڀني ريجنز کي ريفريجريشن کان ٻاهر ڪ be يو وڃي ۽ استعمال کان پهريان ڪمري جي حرارت تي واپس اچڻ جي اجازت ڏني وڃي
(20 ° کان 25 ° C). استعمال ٿيڻ بعد فوري طور تي سڀ ريجنز کي بچايو.
2. سڀني نمونن ۽ ڪنٽرول کي استعمال کان پهريان ويران ڪيو وڃي.
3. هاسس 2 ايڇ آر پي حل جي تياري: ڊيسٽ هاسس هاسس 2 ايڇ آر پي تي مرڪوز 1: 51 مرضن جو تناسب سان تناسب
بفر. مثال طور، 100 ايم پي جي هيلڊس جي 5ml جي بفر سان 100 ايم ايل جي 100 ايم ايل جي 100 μl conture
هڪ هيڪ 2 HRP حل ٺاهيو.
4. 1 × واش حل جي تياري: 20 × ڌوئڻ واري حل کي ختم ڪرڻ يا ڊينيل ڪيل پاڻي سان گڏ
1:19 جو حجم جو تناسب. مثال طور، 20 ايم ايل جو 20 ايم ايل 20 ايم ايل جو حل 380 ايم ايل جو حل يا
1 × ڌوئڻ واري حل جو 400 ايم ايل ٺاهڻ لاء پاڻي ڀريو.
【ملازuamtو فرض جو پروگرام】
1. الڳ نلين ۾، تيار ڪيل هاسو 2-HRP حل.
2. ڪيليبرٽرز، نامعلوم نمونن ۾ نامعلوم نمونن، نامعلوم نمونن ۾ 6 μl شامل ڪريو.
3. مرحلي ۾ 100μl قدم 2 ۾ تيار ٿيل مائڪروپليٽ ويلز مطابق
اڳڪٿي ڪرڻ واري ٽيسٽ ترتيب ڏيڻ.
3. پليٽ سيلر سان پليٽ سيلر سان گڏ ڪريو ۽ 30 منٽن تائين 37 ° C تي شامل ڪريو.
4. پليٽ سيلر کي هٽايو ۽ پليٽ کي چار × واش جي تقريبن 300 μl جي چاليهه حل سان پليٽ کي دٻايو.
5. واشنگاهه کي ڌوئڻ کان پوء ويلز ۾ رڌل مائع کي ختم ڪرڻ لاء ڪاغذ تي ٽيپ تي ٽيپ ڪريو.
6. هر چ roll و حل ڪرڻ ۽ 20 منٽن تائين اونداهي حل ۾ 100 μl شامل ڪريو 20 - 25 ° C تي 20 منٽن تائين.
7. رد عمل کي روڪڻ لاء 50 μL کي 50 μl حل شامل ڪريو.
8. مائڪروپليٽ پڙهندڙ کي 10 منٽن اندر 450 اين ايم ۾ جذبات پڙهو (630nm تائين رسائي آهي)
اعلي صحت واري ڪارڪردگي لاء سفارش ڪئي وئي).