Набор для обнаружения нейтрализующих антител к SARS-CoV-2 (ИФА)
【НАЗНАЧЕНИЕ】
Набор для обнаружения нейтрализующих антител к SARS-CoV-2 представляет собой конкурентный иммуноферментный анализ (ИФА), предназначенный для качественного и полуколичественного обнаружения общих нейтрализующих антител к SARS-CoV-2 в сыворотке и плазме человека. Набор для обнаружения нейтрализующих антител к SARS-CoV-2 можно использовать в качестве вспомогательного средства для выявления лиц с адаптивным иммунным ответом на SARS-CoV-2, указывающим на недавнюю или предшествующую инфекцию. Набор для обнаружения нейтрализующих антител к SARS-CoV-2 не следует использовать для диагностики острой инфекции SARS-CoV-2.
【ВВЕДЕНИЕ】
Коронавирусные инфекции обычно вызывают реакцию нейтрализующих антител. Уровень сероконверсии у пациентов с COVID-19 составляет 50% и 100% на 7-й и 14-й день после появления симптомов соответственно. Для представления знаний соответствующее вируснейтрализующее антитело в крови считается мишенью для определения эффективности антитела, и более высокая концентрация нейтрализующего антитела указывает на более высокую эффективность защиты. Тест на нейтрализацию бляшек (PRNT) признан золотым стандартом для обнаружения нейтрализующих антител. Однако из-за низкой производительности и более высоких требований к эксплуатации PRNT непрактичен для крупномасштабной серодиагностики и оценки вакцин. Набор для обнаружения нейтрализующих антител к SARS-CoV-2 основан на методологии конкурентного иммуноферментного анализа (ELISA), которая позволяет обнаруживать нейтрализующие антитела в образце крови, а также специально определять уровни концентрации антител этого типа.
【Процедура испытания】
1. В отдельные пробирки разлейте аликвоты по 120 мкл приготовленного раствора hACE2-HRP.
2. Добавьте в каждую пробирку по 6 мкл калибраторов, неизвестных образцов, контролей качества и хорошо перемешайте.
3. Перенесите 100 мкл каждой смеси, приготовленной на этапе 2, в соответствующие лунки микропланшета в соответствии с заранее разработанной конфигурацией тестирования.
3. Накройте планшет Plate Sealer и инкубируйте при 37°C в течение 60 минут.
4. Снимите герметик планшета и промойте планшет примерно 300 мкл 1× промывочного раствора на лунку четыре раза.
5. Постучите планшетом по бумажному полотенцу, чтобы удалить остатки жидкости в лунках после промывания.
6. Добавьте по 100 мкл раствора ТМБ в каждую лунку и инкубируйте планшет в темноте при температуре 20–25°C в течение 20 минут.
7. Добавьте в каждую лунку по 50 мкл стоп-раствора, чтобы остановить реакцию.
8. Измерьте поглощение в микропланшетном считывателе при 450 нм в течение 10 минут (для более высокой точности рекомендуется использовать 630 нм в качестве аксессуара).
