Kit de detectare a anticorpilor neutralizanți SARS-CoV-2 (ELISA)

【UTILIZARE PREVENTATĂ】

Kitul de detectare a anticorpilor neutralizanți SARS-CoV-2 este un test imunosorbent competitiv legat de enzime (ELISA) destinat detectării calitative și semi-cantitative a anticorpilor neutralizanți totali la SARS-CoV-2 în ser și plasmă umană. Kitul de detectare a anticorpilor neutralizanți SARS-CoV-2 poate fi utilizat ca ajutor în identificarea persoanelor cu un răspuns imun adaptativ la SARS-CoV-2, indicând infecția recentă sau anterioară. Kitul de detectare a anticorpilor neutralizanți SARS-CoV-2 nu trebuie utilizat pentru a diagnostica infecția acută cu SARS-CoV-2.

【INTRODUCERE】

Infecțiile cu coronavirus induc de obicei răspunsuri cu anticorpi neutralizanți. Ratele de seroconversie la pacienții cu COVID-19 sunt de 50% și 100% în ziua 7 și, respectiv, 14 după debutul simptomelor. Pentru a prezenta cunoștințele, anticorpul de neutralizare a virusului corespunzător din sânge este recunoscut ca o țintă pentru determinarea eficacității anticorpului și o concentrație mai mare a anticorpului de neutralizare indică o eficacitate de protecție mai mare. Testul de neutralizare a reducerii plăcii (PRNT) a fost recunoscut drept standardul de aur pentru detectarea anticorpilor neutralizanți. Cu toate acestea, din cauza debitului său scăzut și a cerințelor mai mari de funcționare, PRNT nu este practic pentru serodiagnosticul la scară largă și evaluarea vaccinurilor. Kitul de detectare a anticorpilor neutralizanți SARS-CoV-2 se bazează pe metodologia ELISA (Competitive Enzyme-Linked Imunosorbent Assay), care poate detecta anticorpul neutralizant din proba de sânge și poate accesa în mod special nivelurile de concentrație ale acestui tip de anticorpi.

 【Procedura de testare】

1. În tuburi separate, alicotați 120 μL din soluția hACE2-HRP preparată.

2. Adăugați 6 μL de calibratori, probe necunoscute, controale de calitate în fiecare tub și amestecați bine.

3. Transferați 100 μL din fiecare amestec preparat în pasul 2 în godeurile de microplăci corespunzătoare conform configurației de testare prestabilite.

3. Acoperiți placa cu Plate Sealer și incubați la 37°C timp de 60 de minute.

4. Îndepărtați placa de etanșare și spălați placa cu aproximativ 300 μL de soluție de spălare 1× per godeu de patru ori.

5. Atingeți placa pe un prosop de hârtie pentru a îndepărta lichidul rezidual din godeuri după etapele de spălare.

6. Adăugați 100 μL de soluție TMB în fiecare godeu și incubați placa la întuneric la 20 – 25°C timp de 20 de minute.

7. Adăugați 50 μL de soluție de oprire în fiecare godeu pentru a opri reacția.

8. Citiți absorbanța în cititorul de microplăci la 450 nm în decurs de 10 minute (630 nm ca accesoriu este recomandat pentru o performanță de mai mare precizie.