Kit de detecção de anticorpos neutralizantes SARS-CoV-2 (ELISA)
【USO PRETENDIDO】
O kit de detecção de anticorpos neutralizantes SARS-CoV-2 é um ensaio imunoenzimático competitivo (ELISA) destinado à detecção qualitativa e semiquantitativa de anticorpos neutralizantes totais para SARS-CoV-2 em soro e plasma humanos. O Kit de Detecção de Anticorpos Neutralizantes SARS-CoV-2 pode ser utilizado como auxílio na identificação de indivíduos com resposta imune adaptativa ao SARS-CoV-2, indicando infecção recente ou anterior. O kit de detecção de anticorpos neutralizantes SARS-CoV-2 não deve ser usado para diagnosticar infecção aguda por SARS-CoV-2.
【INTRODUÇÃO】
As infecções por coronavírus normalmente induzem respostas de anticorpos neutralizantes. As taxas de soroconversão em pacientes com COVID-19 são de 50% e 100% nos dias 7 e 14 após o início dos sintomas, respectivamente. Até ao conhecimento actual, o anticorpo neutralizante de vírus correspondente no sangue é reconhecido como um alvo para determinar a eficácia do anticorpo e uma concentração mais elevada do anticorpo neutralizante indica uma eficácia de protecção mais elevada. O Teste de Neutralização por Redução de Placas (PRNT) vem sendo reconhecido como padrão ouro para detecção de anticorpos neutralizantes. No entanto, devido ao seu baixo rendimento e maior exigência para operação, o PRNT não é prático para sorodiagnóstico e avaliação de vacinas em larga escala. O Kit de Detecção de Anticorpos Neutralizantes SARS-CoV-2 é baseado na metodologia Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA), que pode detectar o anticorpo neutralizante em amostra de sangue, bem como acessar especialmente os níveis de concentração deste tipo de anticorpo.
【Procedimento de teste】
1.Em tubos separados, alíquota de 120μL da solução hACE2-HRP preparada.
2.Adicione 6 μL de calibradores, amostras desconhecidas, controles de qualidade em cada tubo e misture bem.
3. Transfira 100 μL de cada mistura preparada na etapa 2 para os poços da microplaca correspondentes de acordo com a configuração de teste pré-projetada.
3.Cubra a placa com Plate Sealer e incube a 37°C durante 60 minutos.
4.Retire o selador de placa e lave a placa com aproximadamente 300 μL de solução de lavagem 1× por poço quatro vezes.
5. Bata a placa sobre papel toalha para remover o líquido residual dos poços após as etapas de lavagem.
6.Adicione 100 μL de solução TMB a cada poço e incube a placa no escuro a 20 – 25°C durante 20 minutos.
7.Adicione 50 μL de solução de parada a cada poço para interromper a reação.
8. Leia a absorbância no leitor de microplacas a 450 nm em 10 minutos (630 nm como acessório é recomendado para desempenho de maior precisão).
