سارس - Cov-2 بې انصافي کول د انټي انټي انټي کولو کټ (ایلیسه)
【اصل】
سرس - Cov-2 بې انصافي کول د انټي انټي د کشف کټ د رقابتي ایفایکل میتودولوژي پراساس دی.
د ریډپټر شوي ریسیپټر تړل شوي ډنډینګ ډنډینګ ډومین (RBD)، د ویروس سپیک (و) پروټین او د کوربه حجرو څخه پروټین
ریسیپټر AEC2، دا ازموینه د ویروس کوربه بې له تعامل کمولو لپاره ډیزاین شوې.
د کیفیت کنټرولونه، او د پلمو یا پلازما نمونه په انفرادي ډول په شدت کې خورا ګډ شوي
بفر په کوچني ټیوبونو کې د هیس 2-HRP ککړتیا لري. بیا مخلوطات په کې لیږدول کیږي
د مایکروپلټ څاګانې د غیر منطقي خالص نسل سرس - Cov-2 rbd ټوټه (RBD) لپاره
انبار کول. د 30 دقیقو انکول په جریان کې، په کالیکرانو کې د RBD ځانګړي انټي او
نمونې به د ځانګړي پابندۍ لپاره د هیس 2 -P -P (HRP سره سیالي وکړي په څاګانو کې وروسته
د انبار کولو، څاګانې 4 ځله مینځل کیږي ترڅو د UNBUnd هارټ 2-HRP کنجاګو لرې کړي. د
TMB بیا د خونې په حرارت درجه کې د 20 دقیقو لپاره اضافه شوي او رامینځته کیږي، پایله یې د
نیلي رنګ. د رنګ پرمختیا د 1an HCL اضافه کولو سره ودریږي، او جذب دی
د 450. NM NM کې سپیکرو فاتحي. د رامینځته شوي رنګ شدت د
د اوسني موجود مقدار، او په ورته ډول د معیارونو مقدار پورې اړه لري.
د چمتو شوي کمبرانو لخوا رامینځته شوي کالیبریټور، د تمرکز لرونکي بینبرانو لخوا رامینځته شوی
په نامعلوم ډول انټي بائلول بیا محاسبه کیږي.
【اړین توکي اړین ندي مګر چمتو شوي ندي】
1. ناورین یا د ویناوو اوبه
2. دقیقا پایپایټس: 10μl، 100μll، 200μll او 1 ML
3. د توزیع کونکي پایپ لارښوونې
.. د کوچني پلاستیک لوستونکی په 450NM کې د جذب لوستلو وړتیا لري.
5. جذب کاغذ
6. ګراف پا .ه
.. د ورشتیکس مکسر یا مساوي
【د نمونې راټولول او ذخیره کول】
1. په ټیوبونو کې د سیرم او پلازما نمونې په ټیوبونو کې راټول شوي K2-EDTA د دې کټ لپاره کارول کیدی شي.
2. نمونې باید سرلیک شي او ممکن د 48 ساعتونو لپاره په 2 ° C - 87 C کې د 2 ° C لپاره زیرمه شي.
نمونې د اوږدې مودې لپاره نیول شوي (تر 6 میاشتو پورې) باید یوازې د IS -20 C په سینګس کې یو ځل په کنګل شي.
د څو ځله خالي دورانونو څخه مخنیوی.
پروتوکول
【چمتو کول】
1. ټولې هڅې باید له یخچال څخه واخیستل شي او د کارولو دمخه د خونې تودوخې ته د بیرته ستنیدو اجازه ورکړل شي
(20 ° ته 25 ° C). د کارولو وروسته په یخچال کې ټول ریګینټس خوندي کړئ.
.. ټول نمونې او کنټرولونه باید د کارولو دمخه د رایې ورکوونکي څخه برل و.
3. د های 2-HRP د حل لاره چمتو کول: د درنښت سره 5: 51 د لنډمهاله تناسب
بفر د مثال په توګه، د HIS2-HRP د HRP د HRP ډیففیر 5.0ML سره لږه اندازه کړئ
د هریټ 2-HRP حل جوړ کړئ.
. 1 × د وینځلو د لارې چمتووالی
د 1:19 حجم تناسب. د مثال په توګه، د 20 ملی ملی مل سلسله 20 × د days 380 مټ سره د 380 مچۍ سره حل کړئ
شنډ شوي اوبه د 400 ملی میل جوړولو لپاره × د وینځلو لپاره.
【د ازموینې پروسه】
1. په جلا ټیوبونو کې، علی کولو د جوړ شوي هیس 2-HRP حل.
2. د 6 μlibers، ناپیژانو، نامعلوم نمونې، د نوي ټیوب کې د کیفیت کنټرولونه، د کیفیت کنټرولونه اضافه کړئ.
3. د هر مخلوط 100 چینل په 2 مرحله کې چمتو کړئ په 2 مرحله کې چمتو شوی مایکرویل مایکروټ مایکل کوهي کې
د فاسد شوي ازموینې ترتیب لپاره.
3. پلیټ د پلیټ سیلر سره پوښ کړئ او د 30 دقیقو لپاره په 37 ° C کې انکشاف کړئ.
4. د پلیټ سیلر لرې کړئ او پلیټ د نږدې 300 μl 1 × د وینځلو لپاره د 1 × د ویسفورډ سره مینځلو سره مینځئ.
5. د کاغذ تولیه باندې د کاغذ تولیه ټایپ کړئ ترڅو د مرحلو مینځلو وروسته په څاګانو کې د پاتې مایع لرې کړئ.
6. د TMB 100 μl د TMB د TMB حل اضافه کړئ او د 20 دقیقو لپاره په تیاره کې پلیټ کې ټکان په 20 - 25 ° C کې.
7. د عکس العمل مخه نیولو لپاره هر یو ښه حل اضافه کړئ.
8. په ملیپلټ لوستونکي کې د مایکلپلټ ریډر کې په 450 nm nm کې (630NM) د لاسرسي په توګه ولولئ
د لوړې دقیق فعالیت لپاره وړاندیز شوی).