د مونکیپوکس ویروس (MPV) نیوکلیک اسید کشف کټ

کټ کې د 48 ازموینو یا کیفیت کنټرول پروسس کولو لپاره ریجنټونه شامل دي ، پشمول د لاندې برخو په شمول:

ریجنټ A

ReagentB

یادونه: د مختلفو بسته نمبرونو اجزا د یو بل په بدل کې نشي کارول کیدی

【د ذخیره کولو شرایط او د شیلف ژوند】

1. Reagent A/B په 2-30 ° C کې زیرمه کیدی شي، او د شیلف ژوند 10 میاشتې دی.

2. مهرباني وکړئ د ټیسټ ټیوب پوښ یوازې هغه وخت خلاص کړئ کله چې تاسو ازموینې ته چمتو یاست.

3. د ختمیدو نیټې څخه وروسته د ټیسټ ټیوبونه مه کاروئ.

4. د لیک کشف کولو ټیوب مه کاروئ.

【د تطبیق وړ وسیله】

د LC480 PCR تحلیل سیسټم لپاره مناسب، د Gentier 48E اتوماتیک PCR تحلیل سیسټم، ABI7500 PCR تحلیل سیسټم.

【د نمونې اړتیاوې】

1. د تطبیق وړ نمونې ډولونه: د ستوني swabs نمونې.

2. د نمونې حل:د تایید وروسته، دا سپارښتنه کیږي چې د نمونې راټولولو لپاره د هانګزو ټیسټسي بیولوژي لخوا تولید شوي نورمال مالګین یا د ویروس محافظت ټیوب وکاروئ.

د ستوني غوټه:دوه اړخیز فارینجیل ټونسیلونه او د پورتنۍ فارینجیل دیوال د ضایع کیدو وړ جراثیمي نمونې اخیستو سویب سره پاک کړئ ، سویب په ټیوب کې ډوب کړئ چې د 3mL نمونې محلول لري ، لکۍ پرې کړئ او د تیوب پوښ کلک کړئ.

3. نمونه ذخیره کول او تحویلول:د ازموینې لپاره نمونې باید ژر تر ژره معاینه شي.د ترانسپورت تودوخه باید په 2 ~ 8 ℃ کې وساتل شي. هغه نمونې چې په 24 ساعتونو کې ازمول کیدی شي په 2 ℃ ~ 8 ℃ کې زیرمه کیدی شي او که چیرې نمونې په 24 ساعتونو کې ونه ازمول شي ، دا باید لږ یا مساوي ذخیره شي تر -70 ℃ (که چیرې د -70 ℃ د ذخیره کولو شرایط شتون نلري، دا په موقتي توګه -20 ℃ کې زیرمه کیدی شي)، د تکرار څخه ډډه وکړئ

یخ کول او پړسیدل.

4. مناسب نمونې راټولول، ذخیره کول، او ټرانسپورټ د دې محصول د فعالیت لپاره مهم دي.

【د ازموینې طریقه】

1.Sample پروسس او نمونه اضافه

1.1 د نمونې پروسس کول

د نمونو سره د پورته نمونې محلول مخلوط کولو وروسته، د نمونې 30μL د DNA خوشې کولو ریجینټ ټیوب کې واچوئ او په مساوي ډول سره مخلوط کړئ.

1.2 بار کول

20μL د بیارغونې ریجنټ واخلئ او د MPV کشف ریجینټ ته یې اضافه کړئ، د پورته پروسس شوي نمونې 5μL اضافه کړئ (مثبت کنټرول او منفي کنټرول باید د نمونو سره موازي پروسس شي)، د ټیوب کیپ پوښ کړئ، په 2000rpm کې د 10 لپاره سینټرفیوج کړئ. ثانیې

2. د PCR پراخول

2.1 چمتو شوي PCR پلیټ/ټیوبونه د فلوروسینس PCR وسیلې ته بار کړئ ، د هرې ازموینې لپاره منفي کنټرول او مثبت کنټرول باید تنظیم شي.

2.2 د فلوروسینټ چینل ترتیب:

1) د MPV کشف لپاره FAM چینل غوره کړئ؛

2) د داخلي کنټرول جین کشف لپاره HEX/VIC چینل غوره کړئ؛

3. د پایلو تحلیل

اساس کرښه د منفي کنټرول د فلوروسینټ وکر له لوړې نقطې څخه پورته تنظیم کړئ.

4. کیفیت کنټرول

4.1 منفي کنټرول: په FAM، HEX/VIC چینل، یا Ct40 کې د Ct ارزښت ندی موندل شوی

4.2 مثبت کنټرول: په FAM، HEX/VIC چینل، Ct≤40

4.3 پورته اړتیاوې باید په ورته تجربه کې پوره شي، که نه نو د ازموینې پایلې باطلې دي او تجربه باید تکرار شي.

【د ارزښت قطع کول】

یوه نمونه مثبته ګڼل کیږي کله چې: د هدف ترتیب Ct≤40، د داخلي کنټرول جین Ct≤40.

【د پایلو تفسیر】

یوځل چې د کیفیت کنټرول تیریږي ، کارونکي باید وګوري چې ایا په HEX/VIC چینل کې د هرې نمونې لپاره د امپلیفیکیشن وکر شتون لري ، که چیرې شتون ولري او د Ct≤40 سره ، دا په ګوته کوي چې د داخلي کنټرول جین په بریالیتوب سره پراخ شوی او دا ځانګړي ازموینه د اعتبار وړ ده.کاروونکي کولی شي د تعقیب تحلیل ته لاړ شي:

3. د نمونو لپاره چې د داخلي کنټرول جین پراخولو سره ناکام شوي (HEX/VIC

چینل، Ct＞40، یا د امپلیفیکیشن وکر نه)، ټیټ ویروس بار یا د PCR مخنیوی کونکي شتون د ناکامۍ لامل کیدی شي، ازموینه باید د نمونې راټولولو څخه تکرار شي؛

4. د مثبتو نمونو او کلتور شوي ویروس لپاره، د داخلي کنټرول پایلې اغیزه نه کوي؛

د نمونو لپاره چې منفي ازمول شوي، داخلي کنټرول ته اړتیا ده چې مثبته ازموینه وشي که نه نو ټولیزه پایله باطله ده او ازموینه باید تکرار شي، د نمونې راټولولو مرحلې څخه پیل کیږي.