Zestaw do wykrywania przeciwciał neutralizujących SARS-CoV-2 (ELISA)

Krótki opis:


Szczegóły produktu

Tagi produktów

ZASADA

Zestaw do wykrywania przeciwciał neutralizujących SARS-CoV-2 oparty jest na konkurencyjnej metodologii ELISA.

Przy użyciu oczyszczonej domeny wiążącej receptor (RBD), białka z białka kolca wirusa (S) i komórki gospodarza

receptora ACE2, test ten ma naśladować interakcję neutralizującą wirus-gospodarz.

Kalibratory, kontrole jakości oraz próbki surowicy lub osocza są indywidualnie dobrze wymieszane w rozcieńczeniu

bufor zawierający koniugat hACE2-HRP podzielony na porcje w małych probówkach. Następnie mieszaniny przenosi się do

studzienki mikropłytek zawierające unieruchomiony, rekombinowany fragment RBD SARS-CoV-2 (RBD) dla

inkubacja. Podczas 30-minutowej inkubacji przeciwciała specyficzne dla RBD w kalibratorach, kontroli jakości i

próbki będą konkurować z hACE2-HRP o specyficzne wiązanie RBD unieruchomionego w dołkach. Po

inkubacji, dołki przemywa się 4 razy w celu usunięcia niezwiązanego koniugatu hACE2-HRP. Rozwiązanie

Następnie dodaje się TMB i inkubuje przez 20 minut w temperaturze pokojowej, w wyniku czego powstaje a

kolor niebieski. Pojawienie się koloru zatrzymuje się przez dodanie 1N HCl i absorbancję

mierzono spektrofotometrycznie przy 450 nm. Intensywność powstałego koloru jest proporcjonalna do

ilość obecnego enzymu i jest odwrotnie proporcjonalna do ilości standardów oznaczanych w ten sam sposób.

Poprzez porównanie z krzywą kalibracyjną utworzoną przez dostarczone kalibratory, stężenie

następnie oblicza się przeciwciała neutralizujące w nieznanej próbce.

1
2

MATERIAŁY WYMAGANE, ALE NIE DOSTĘPNE

1. Woda destylowana lub dejonizowana

2. Pipety precyzyjne: 10μL, 100μL, 200μL i 1 mL

3. Jednorazowe końcówki do pipet

4. Czytnik mikropłytek umożliwiający odczyt absorbancji przy 450 nm.

5. Papier chłonny

6. Papier milimetrowy

7. Mieszadło wirowe lub jego odpowiednik

POBIERANIE I PRZECHOWYWANIE PRÓBEK

1. W tym zestawie można używać próbek surowicy i osocza pobranych w probówkach zawierających K2-EDTA.

2. Próbki należy zamknąć korkiem i można je przechowywać przed oznaczeniem do 48 godzin w temperaturze 2–8°C.

Próbki przechowywane przez dłuższy czas (do 6 miesięcy) należy przed oznaczeniem zamrozić tylko raz w temperaturze -20°C.

Unikaj powtarzających się cykli zamrażania i rozmrażania.

PROTOKÓŁ

3

Przygotowanie odczynnika

1. Przed użyciem wszystkie odczynniki należy wyjąć z lodówki i poczekać, aż osiągną temperaturę pokojową

(20° do 25°C). Natychmiast po użyciu wszystkie odczynniki należy przechowywać w lodówce.

2. Wszystkie próbki i kontrole należy przed użyciem wytrząsnąć na worteksie.

3. Przygotowanie roztworu hACE2-HRP: Rozcieńczyć koncentrat hACE2-HRP w stosunku 1:51 za pomocą Dilution

Bufor. Na przykład rozcieńczyć 100 µl koncentratu hACE2-HRP 5,0 ml buforu do rozcieńczania HRP do

przygotować roztwór hACE2-HRP.

4. 1× Przygotowanie roztworu płuczącego: Rozcieńczyć 20× roztworu płuczącego wodą dejonizowaną lub destylowaną za pomocą

stosunek objętości 1:19. Na przykład rozcieńczyć 20 ml 20× roztworu płuczącego 380 ml dejonizowanego lub

wodę destylowaną, aby przygotować 400 ml 1× roztworu płuczącego.

Procedura testowa

1. W oddzielnych probówkach podziel na porcje 120 µl przygotowanego roztworu hACE2-HRP.

2. Do każdej probówki dodać 6 µl kalibratorów, nieznanych próbek i kontroli jakości i dobrze wymieszać.

3. Przenieść 100 µl każdej mieszaniny przygotowanej w kroku 2 do odpowiednich dołków mikropłytki zgodnie z instrukcją

do wcześniej zaprojektowanej konfiguracji testowej.

3. Przykryj płytkę Plate Sealer i inkubuj w temperaturze 37°C przez 30 minut.

4. Usunąć uszczelniacz płytki i przemyć płytkę cztery razy około 300 µl 1× roztworu płuczącego na dołek.

5. Ostukaj płytkę ręcznikiem papierowym, aby usunąć resztki płynu z dołków po etapach przemywania.

6. Dodać 100 µl roztworu TMB do każdego dołka i inkubować płytkę w ciemności w temperaturze 20–25°C przez 20 minut.

7. Dodaj 50 µl roztworu zatrzymującego do każdego dołka, aby zatrzymać reakcję.

8. Odczytać absorbancję w czytniku mikropłytek przy 450 nm w ciągu 10 minut (630 nm jako wyposażenie dodatkowe).

zalecane dla większej precyzji działania).

Wyślij do nas wiadomość:

Wyślij do nas wiadomość:

Napisz tutaj swoją wiadomość i wyślij ją do nas