Zestaw do wykrywania przeciwciał neutralizujących SARS-CoV-2 (ELISA)
【PRZEZNACZENIE】
Zestaw do wykrywania przeciwciał neutralizujących SARS-CoV-2 jest konkurencyjnym testem immunoenzymatycznym (ELISA) przeznaczonym do jakościowego i półilościowego wykrywania całkowitych przeciwciał neutralizujących przeciwko SARS-CoV-2 w ludzkiej surowicy i osoczu. Zestaw do wykrywania przeciwciał neutralizujących SARS-CoV-2 może być stosowany jako pomoc w identyfikacji osób z nabytą odpowiedzią immunologiczną na SARS-CoV-2, wskazującą na niedawną lub wcześniejszą infekcję. Zestawu do wykrywania przeciwciał neutralizujących SARS-CoV-2 nie należy używać do diagnozowania ostrego zakażenia wirusem SARS-CoV-2.
【WSTĘP】
Zakażenia koronawirusem zazwyczaj wywołują reakcję przeciwciał neutralizujących. Wskaźniki serokonwersji u pacjentów z Covid-19 wynoszą odpowiednio 50% i 100% w 7. i 14. dniu od wystąpienia objawów. Według stanu wiedzy odpowiednie przeciwciało neutralizujące wirusa we krwi jest uznawane za cel do określenia skuteczności przeciwciała, a wyższe stężenie przeciwciała neutralizującego wskazuje na wyższą skuteczność ochronną. Test neutralizacji redukcji płytki nazębnej (PRNT) został uznany za złoty standard w wykrywaniu przeciwciał neutralizujących. Jednakże, ze względu na niską wydajność i większe wymagania operacyjne, PRNT nie jest praktyczny w przypadku serodiagnostyki i oceny szczepionek na dużą skalę. Zestaw do wykrywania przeciwciał neutralizujących SARS-CoV-2 oparty jest na metodologii konkurencyjnego testu immunoenzymatycznego (ELISA), który umożliwia wykrycie przeciwciał neutralizujących w próbce krwi, a także specjalny dostęp do poziomów stężeń tego typu przeciwciał.
【Procedura testowa】
1. W oddzielnych probówkach podziel na porcje 120 µl przygotowanego roztworu hACE2-HRP.
2.Do każdej probówki dodać 6 µl kalibratorów, nieznanych próbek i kontroli jakości i dobrze wymieszać.
3. Przenieść 100 μl każdej mieszaniny przygotowanej w kroku 2 do odpowiednich dołków mikropłytki zgodnie z wcześniej zaprojektowaną konfiguracją testową.
3.Przykryj płytkę Plate Sealer i inkubuj w temperaturze 37°C przez 60 minut.
4. Usunąć uszczelniacz płytek i przemyć płytkę cztery razy około 300 µl 1× roztworu płuczącego na dołek.
5. Ostukaj płytkę ręcznikiem papierowym, aby usunąć resztki płynu z dołków po etapach przemywania.
6.Do każdego dołka dodać 100 µl roztworu TMB i inkubować płytkę w ciemności w temperaturze 20 – 25°C przez 20 minut.
7.Do każdego dołka dodać 50 µl roztworu zatrzymującego, aby zatrzymać reakcję.
8. Odczytaj absorbancję w czytniku mikropłytek przy 450 nm w ciągu 10 minut (w celu uzyskania większej precyzji zalecane jest 630 nm jako wyposażenie dodatkowe).
