SARS-CoV-2 ਨਿਊਟਰਲਾਈਜ਼ਿੰਗ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਡਿਟੈਕਸ਼ਨ ਕਿੱਟ (ELISA)
【ਸਿਧਾਂਤ】
SARS-CoV-2 ਨਿਰਪੱਖ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਖੋਜ ਕਿੱਟ ਪ੍ਰਤੀਯੋਗੀ ELISA ਵਿਧੀ 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਹੈ।
ਸ਼ੁੱਧ ਰੀਸੈਪਟਰ ਬਾਈਡਿੰਗ ਡੋਮੇਨ (ਆਰਬੀਡੀ), ਵਾਇਰਲ ਸਪਾਈਕ (ਐਸ) ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਅਤੇ ਹੋਸਟ ਸੈੱਲ ਤੋਂ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨਾ
ਰੀਸੈਪਟਰ ACE2, ਇਹ ਟੈਸਟ ਵਾਇਰਸ-ਹੋਸਟ ਨਿਰਪੱਖ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਨ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।
ਕੈਲੀਬ੍ਰੇਟਰ, ਗੁਣਵੱਤਾ ਨਿਯੰਤਰਣ, ਅਤੇ ਸੀਰਮ ਜਾਂ ਪਲਾਜ਼ਮਾ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪਤਲੇਪਣ ਵਿੱਚ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਏ ਜਾਂਦੇ ਹਨ
HACE2-HRP ਕੰਜੂਗੇਟ ਵਾਲਾ ਬਫਰ ਛੋਟੀਆਂ ਟਿਊਬਾਂ ਵਿੱਚ ਅਲੀਕੋਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।ਫਿਰ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਨੂੰ ਅੰਦਰ ਤਬਦੀਲ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ
ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਖੂਹ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਸਥਿਰ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ SARS-CoV-2 RBD ਫਰੈਗਮੈਂਟ (RBD) ਲਈ
ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ30-ਮਿੰਟ ਦੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਹੋਣ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, ਕੈਲੀਬ੍ਰੇਟਰਾਂ ਵਿੱਚ ਆਰਬੀਡੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਟੀਬਾਡੀ, QC ਅਤੇ
ਖੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਸਥਿਰ RBD ਨੂੰ ਖਾਸ ਬਾਈਡਿੰਗ ਲਈ ਨਮੂਨੇ hACE2-HRP ਨਾਲ ਮੁਕਾਬਲਾ ਕਰਨਗੇ।ਤੋਂ ਬਾਅਦ
ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਹੋਣ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, ਖੂਹਾਂ ਨੂੰ ਅਣਬਾਊਂਡ hACE2-HRP ਸੰਜੋਗ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ 4 ਵਾਰ ਧੋਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਦਾ ਇੱਕ ਹੱਲ
ਫਿਰ TMB ਨੂੰ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 20 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਏ
ਨੀਲਾ ਰੰਗ.1N HCl ਦੇ ਜੋੜ ਦੇ ਨਾਲ ਰੰਗ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਰੋਕਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਸਮਾਈ ਹੁੰਦੀ ਹੈ
450 nm 'ਤੇ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ।ਬਣਾਏ ਗਏ ਰੰਗ ਦੀ ਤੀਬਰਤਾ ਦੇ ਅਨੁਪਾਤਕ ਹੈ
ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਮੌਜੂਦ ਹੈ, ਅਤੇ ਉਸੇ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਮਾਪਦੰਡਾਂ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨਾਲ ਉਲਟਾ ਸਬੰਧਿਤ ਹੈ।
ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੇ ਕੈਲੀਬ੍ਰੇਟਰਾਂ ਦੁਆਰਾ ਬਣਾਈ ਗਈ ਕੈਲੀਬ੍ਰੇਸ਼ਨ ਕਰਵ ਨਾਲ ਤੁਲਨਾ ਕਰਕੇ, ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ
ਅਗਿਆਤ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਨੂੰ ਬੇਅਸਰ ਕਰਨ ਦੀ ਫਿਰ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
【ਸਮੱਗਰੀ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ ਪਰ ਪ੍ਰਦਾਨ ਨਹੀਂ ਕੀਤੀ ਗਈ】
1. ਡਿਸਟਿਲ ਜਾਂ ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਪਾਣੀ
2. ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਪਾਈਪੇਟਸ: 10μL, 100μL, 200μL ਅਤੇ 1 ਮਿ.ਲੀ.
3. ਡਿਸਪੋਸੇਬਲ ਪਾਈਪੇਟ ਸੁਝਾਅ
4. ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਰੀਡਰ 450nm 'ਤੇ ਸਮਾਈ ਨੂੰ ਪੜ੍ਹਨ ਦੇ ਸਮਰੱਥ ਹੈ।
5. ਸੋਖਣ ਵਾਲਾ ਕਾਗਜ਼
6. ਗ੍ਰਾਫ਼ ਪੇਪਰ
7. ਵੌਰਟੇਕਸ ਮਿਕਸਰ ਜਾਂ ਬਰਾਬਰ
【ਨਮੂਨੇ ਦਾ ਸੰਗ੍ਰਹਿ ਅਤੇ ਸਟੋਰੇਜ】
1. K2-EDTA ਵਾਲੀਆਂ ਟਿਊਬਾਂ ਵਿੱਚ ਇਕੱਤਰ ਕੀਤੇ ਸੀਰਮ ਅਤੇ ਪਲਾਜ਼ਮਾ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਇਸ ਕਿੱਟ ਲਈ ਵਰਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।
2. ਨਮੂਨੇ ਬੰਦ ਕੀਤੇ ਜਾਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਜਾਂਚ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ 2 °C - 8 °C 'ਤੇ 48 ਘੰਟਿਆਂ ਤੱਕ ਸਟੋਰ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।
ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ (6 ਮਹੀਨਿਆਂ ਤੱਕ) ਲਈ ਰੱਖੇ ਗਏ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਪਰਖ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ -20 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਸਿਰਫ ਇੱਕ ਵਾਰ ਫ੍ਰੀਜ਼ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
ਵਾਰ-ਵਾਰ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਥੌਅ ਚੱਕਰਾਂ ਤੋਂ ਬਚੋ।
ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ
【ਰੀਐਜੈਂਟ ਦੀ ਤਿਆਰੀ】
1. ਸਾਰੇ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਨੂੰ ਫਰਿੱਜ ਤੋਂ ਬਾਹਰ ਕੱਢਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਵਾਪਸ ਜਾਣ ਦਿੱਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ
(20° ਤੋਂ 25°C)।ਵਰਤੋਂ ਦੇ ਤੁਰੰਤ ਬਾਅਦ ਸਾਰੇ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਨੂੰ ਫਰਿੱਜ ਵਿੱਚ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਕਰੋ।
2. ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਸਾਰੇ ਨਮੂਨੇ ਅਤੇ ਨਿਯੰਤਰਣਾਂ ਨੂੰ ਘੁੰਮਾਇਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ.
3. hACE2-HRP ਹੱਲ ਦੀ ਤਿਆਰੀ: 1:51 ਪਤਲੇ ਅਨੁਪਾਤ ਨਾਲ ਪਤਲੇ hACE2-HRP ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ
ਬਫਰ.ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, 100 μL hACE2-HRP ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ 5.0mL HRP ਡਾਇਲਿਊਸ਼ਨ ਬਫਰ ਨਾਲ ਪਤਲਾ ਕਰੋ
ਇੱਕ hACE2-HRP ਹੱਲ ਬਣਾਓ।
4. 1× ਵਾਸ਼ ਘੋਲ ਦੀ ਤਿਆਰੀ: 20 × ਵਾਸ਼ ਘੋਲ ਨੂੰ ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਜਾਂ ਡਿਸਟਿਲਡ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਪਤਲਾ ਕਰੋ
ਵਾਲੀਅਮ ਅਨੁਪਾਤ 1:19।ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, 20 × ਵਾਸ਼ ਘੋਲ ਦੇ 20 ਮਿ.ਲੀ. ਨੂੰ 380 ਮਿ.ਲੀ. ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਜਾਂ ਪਤਲਾ ਕਰੋ।
1×ਵਾਸ਼ ਘੋਲ ਦਾ 400 ਮਿ.ਲੀ. ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਡਿਸਟਿਲ ਵਾਟਰ।
【ਟੈਸਟ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ】
1. ਵੱਖਰੀਆਂ ਟਿਊਬਾਂ ਵਿੱਚ, ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ hACE2-HRP ਘੋਲ ਦਾ ਅਲੀਕੋਟ 120μL।
2. ਹਰੇਕ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ 6 μL ਕੈਲੀਬ੍ਰੇਟਰ, ਅਣਜਾਣ ਨਮੂਨੇ, ਗੁਣਵੱਤਾ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ ਅਤੇ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਰਲਾਓ।
3. ਪੜਾਅ 2 ਵਿੱਚ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਹਰੇਕ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦਾ 100μL ਅਨੁਸਾਰੀ ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਖੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰੋ
ਪ੍ਰੀ-ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕੀਤੇ ਟੈਸਟ ਕੌਂਫਿਗਰੇਸ਼ਨ ਲਈ।
3. ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਪਲੇਟ ਸੀਲਰ ਨਾਲ ਢੱਕੋ ਅਤੇ 37°C 'ਤੇ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।
4. ਪਲੇਟ ਸੀਲਰ ਨੂੰ ਹਟਾਓ ਅਤੇ ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਲਗਭਗ 300 μL ਦੇ 1×ਵਾਸ਼ ਘੋਲ ਪ੍ਰਤੀ ਖੂਹ ਨਾਲ ਚਾਰ ਵਾਰ ਧੋਵੋ।
5. ਕਦਮ ਧੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਖੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਬਚੇ ਹੋਏ ਤਰਲ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਕਾਗਜ਼ ਦੇ ਤੌਲੀਏ 'ਤੇ ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਟੈਪ ਕਰੋ।
6. ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 100 μL TMB ਘੋਲ ਪਾਓ ਅਤੇ ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਹਨੇਰੇ ਵਿੱਚ 20 - 25°C 'ਤੇ 20 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।
7. ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 50 μL ਸਟਾਪ ਸਲਿਊਸ਼ਨ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।
8. ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਰੀਡਰ ਵਿੱਚ 10 ਮਿੰਟਾਂ ਦੇ ਅੰਦਰ 450 nm 'ਤੇ ਸੋਖਣ ਨੂੰ ਪੜ੍ਹੋ (630nm ਸਹਾਇਕ ਵਜੋਂ
ਉੱਚ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਲਈ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ)।
