SARS-CoV-2 ନିରପେକ୍ଷୀକରଣ ଆଣ୍ଟିବଡି ଚିହ୍ନଟ କିଟ୍ (ELISA)
【PRINCIPLE】
SARS-CoV-2 ନିରପେକ୍ଷୀକରଣ ଆଣ୍ଟିବଡି ଚିହ୍ନଟ କିଟ୍ ପ୍ରତିଯୋଗିତାମୂଳକ ELISA ପଦ୍ଧତି ଉପରେ ଆଧାରିତ |
ଶୁଦ୍ଧ ରିସେପ୍ଟର ବାଇଣ୍ଡିଂ ଡୋମେନ୍ (ଆରବିଡି), ଭାଇରାଲ୍ ସ୍ପାଇକ୍ (S) ପ୍ରୋଟିନ୍ ଏବଂ ହୋଷ୍ଟ ସେଲ୍ ରୁ ପ୍ରୋଟିନ୍ ବ୍ୟବହାର କରି |
ରିସେପ୍ଟର ACE2, ଏହି ପରୀକ୍ଷଣ ଭାଇରସ୍-ହୋଷ୍ଟ ନିରପେକ୍ଷତା ପାରସ୍ପରିକ କାର୍ଯ୍ୟକୁ ଅନୁକରଣ କରିବା ପାଇଁ ଡିଜାଇନ୍ କରାଯାଇଛି |
କାଲିବ୍ରେଟର, ଗୁଣବତ୍ତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ, ଏବଂ ସେରମ୍ କିମ୍ବା ପ୍ଲାଜମା ନମୁନାଗୁଡିକ ପୃଥକ ଭାବରେ ମିଶ୍ରଣରେ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶ୍ରିତ |
ଛୋଟ ଟ୍ୟୁବରେ HACE2-HRP କଞ୍ଜୁଗେଟ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା ବଫର୍ |ତା’ପରେ ମିଶ୍ରଣଗୁଡ଼ିକ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ ହୁଏ |
ମାଇକ୍ରୋପ୍ଲେଟ୍ କୂଅଗୁଡ଼ିକ ପାଇଁ ଇମୋବାଇଲାଇଜଡ୍ ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ SARS-CoV-2 RBD ଖଣ୍ଡ (RBD) ଧାରଣ କରିଥାଏ |
ଇନକ୍ୟୁବେସନ30 ମିନିଟର ଇନକ୍ୟୁବେସନ ସମୟରେ, କାଲିବ୍ରେଟରରେ RBD ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଆଣ୍ଟିବଡି, QC ଏବଂ |
କୂଅରେ ଇମୋବାଇଲାଇଜଡ୍ ହୋଇଥିବା RBD କୁ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବାନ୍ଧିବା ପାଇଁ ନମୁନାଗୁଡିକ HACE2-HRP ସହିତ ପ୍ରତିଦ୍ୱନ୍ଦ୍ୱିତା କରିବ |ପରେ
ଇନକ୍ୟୁବେସନ, କୂଅଗୁଡିକ 4 ଥର ଧୋଇଯାଏ, ଅନାବୃତ hACE2-HRP କଞ୍ଜୁଗେଟ୍ ଅପସାରଣ କରିବାକୁ |ର ସମାଧାନ |
ଟିଏମବି ତା’ପରେ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ 20 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଯୋଡା ଯାଇଥାଏ ଏବଂ ଫଳସ୍ୱରୂପ a ର ବିକାଶ ହୁଏ |
ନୀଳ ରଙ୍ଗ |1N HCl ଯୋଗ ସହିତ ରଙ୍ଗ ବିକାଶ ବନ୍ଦ ହୋଇଯାଏ, ଏବଂ ଅବଶୋଷଣ ହେଉଛି |
450 nm ରେ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରଫୋଟୋମେଟ୍ରିକ୍ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା |ଗଠିତ ରଙ୍ଗର ତୀବ୍ରତା ସହିତ ଆନୁପାତିକ |
ଉପସ୍ଥିତ ଏନଜାଇମର ପରିମାଣ, ଏବଂ ସମାନ ଭାବରେ ଅନୁଧ୍ୟାନ କରାଯାଇଥିବା ମାନାଙ୍କ ପରିମାଣ ସହିତ ବିପରୀତ ଭାବରେ ଜଡିତ |
ପ୍ରଦତ୍ତ କାଲିବ୍ରେଟର ଦ୍ formed ାରା ଗଠିତ କାଲିବ୍ରେସନ୍ ବକ୍ର ସହିତ ତୁଳନା କରି, ଏକାଗ୍ରତା |
ଅଜ୍ଞାତ ନମୁନାରେ ଆଣ୍ଟିବଡିଗୁଡିକ ନିରପେକ୍ଷ କରିବା ପରେ ଗଣନା କରାଯାଏ |
【ସାମଗ୍ରୀଗୁଡିକ ଆବଶ୍ୟକ କିନ୍ତୁ ପ୍ରଦାନ କରାଯାଇ ନାହିଁ |】
1. ଡିଷ୍ଟିଲ୍ କିମ୍ବା ଡିଅନାଇଜଡ୍ ଜଳ |
2. ସଠିକ୍ ପାଇପେଟ୍: 10μL, 100μL, 200μL ଏବଂ 1 mL |
3. ନିଷ୍କ୍ରିୟ ପାଇପେଟ୍ ଟିପ୍ସ |
4. ମାଇକ୍ରୋପ୍ଲେଟ୍ ରିଡର୍ 450nm ରେ ଅବଶୋଷଣ ପ reading ିବାରେ ସକ୍ଷମ |
5. ଅବିଶ୍ୱାସୀ କାଗଜ |
6. ଗ୍ରାଫ୍ ପେପର |
7. ଭର୍ଟେକ୍ସ ମିକ୍ସର୍ କିମ୍ବା ସମାନ |
【ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ସଂଗ୍ରହ ଏବଂ ସଂରକ୍ଷଣ |】
1. K2-EDTA ଧାରଣ କରିଥିବା ଟ୍ୟୁବରେ ସଂଗୃହିତ ସେରମ୍ ଏବଂ ପ୍ଲାଜମା ନମୁନା ଏହି କିଟ୍ ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ |
2. ନମୁନାଗୁଡିକ କ୍ୟାପ୍ କରାଯିବା ଉଚିତ ଏବଂ ଅନୁସନ୍ଧାନ ପୂର୍ବରୁ 2 ° C - 8 ° C ରେ 48 ଘଣ୍ଟା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଗଚ୍ଛିତ ହୋଇପାରେ |
ଅଧିକ ସମୟ (6 ମାସ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ) ଧରି ରଖାଯାଇଥିବା ନମୁନାଗୁଡିକ ଅନୁଧ୍ୟାନ ପୂର୍ବରୁ -20 ° C ରେ ଥରେ ଫ୍ରିଜ୍ ହେବା ଉଚିତ |
ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍-ଥ୍ ଚକ୍ରରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ |
ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ |
【ପୁନ ag ପ୍ରସ୍ତୁତି |】
1. ସମସ୍ତ ରେଜେଣ୍ଟଗୁଡିକ ରେଫ୍ରିଜରେଜେସନ୍ ରୁ ବାହାର କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ ଏବଂ ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାକୁ ଫେରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦିଆଯିବା ଆବଶ୍ୟକ |
(20 ° ରୁ 25 ° C)ବ୍ୟବହାର ପରେ ତୁରନ୍ତ ରେଫ୍ରିଜରେଟରରେ ସମସ୍ତ ରେଜେଣ୍ଟ୍ ସଞ୍ଚୟ କରନ୍ତୁ |
2. ସମସ୍ତ ନମୁନା ଏବଂ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ଭର୍ଟେକ୍ସଡ୍ ହେବା ଉଚିତ |
3. hACE2-HRP ସମାଧାନ ପ୍ରସ୍ତୁତି: Dilution ସହିତ HACE2-HRP ଏକାଗ୍ରତା 1: 51 ମିଶ୍ରଣ ଅନୁପାତରେ |
ବଫର୍ |ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, 100 μL HACE2-HRP ଏକାଗ୍ରତାକୁ 5.0mL HRP ଦିଲ୍ୟୁସନ୍ ବଫର୍ ସହିତ ମିଶାନ୍ତୁ |
ଏକ hACE2-HRP ସମାଧାନ କରନ୍ତୁ |
4. 1 × ଧୋଇବା ସମାଧାନ ପ୍ରସ୍ତୁତି: 20 × ୱାଶ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ କୁ ଡିଓନାଇଜଡ୍ କିମ୍ବା ଡିଷ୍ଟିଲ୍ ପାଣିରେ ମିଶାନ୍ତୁ |
ଭଲ୍ୟୁମ୍ ଅନୁପାତ 1:19 |ଉଦାହରଣ ସ୍ .ରୁପ, 20 ମିଲ୍ 20 × ୱାଶ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ କୁ 380 ଏମଏଲ୍ ଡିଓନାଇଜଡ୍ ସହିତ ମିଶାନ୍ତୁ କିମ୍ବା |
400 ମିଲି 1 × ୱାଶ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ତିଆରି କରିବାକୁ ଡିଷ୍ଟିଲ୍ ପାଣି |
【ପରୀକ୍ଷା ପ୍ରଣାଳୀ】
1. ଅଲଗା ଟ୍ୟୁବରେ, ପ୍ରସ୍ତୁତ HACE2-HRP ସମାଧାନର 120μL ଆଲିକଟ୍ |
2. ପ୍ରତ୍ୟେକ ଟ୍ୟୁବରେ 6 μL କାଲିବ୍ରେଟର, ଅଜ୍ଞାତ ନମୁନା, ଗୁଣାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶାନ୍ତୁ |
3. ଷ୍ଟେପ୍ 2 ରେ ପ୍ରସ୍ତୁତ ପ୍ରତ୍ୟେକ ମିଶ୍ରଣର 100μL ଅନୁରୂପ ମାଇକ୍ରୋପ୍ଲେଟ୍ କୂଅକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରନ୍ତୁ |
ପୂର୍ବ ପରୀକ୍ଷଣ ପରୀକ୍ଷଣକୁ
3. ପ୍ଲେଟ୍ ସିଲର୍ ସହିତ ପ୍ଲେଟ୍କୁ ଘୋଡାନ୍ତୁ ଏବଂ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 37 ° C ରେ ଇନ୍କ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ |
4. ପ୍ଲେଟ୍ ସିଲର୍ କା ove ଼ି ପ୍ଲେଟ୍କୁ ପାଖାପାଖି 300 μL 1 × ୱାଶ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ସହିତ ଚାରିଥର ଧୋଇ ଦିଅ |
5. ଷ୍ଟେପ୍ ଧୋଇବା ପରେ କୂଅରେ ଥିବା ଅବଶିଷ୍ଟ ତରଳ ପଦାର୍ଥକୁ ବାହାର କରିବା ପାଇଁ କାଗଜ ଟାୱେଲରେ ପ୍ଲେଟ୍ ଟ୍ୟାପ୍ କରନ୍ତୁ |
6. ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ 100 μL ଟିଏମବି ସଲ୍ୟୁସନ୍ ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ 20 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 20 - 25 ° C ରେ ପ୍ଲେଟକୁ ଅନ୍ଧାରରେ ଇନ୍କ୍ୟୁବ୍ କରନ୍ତୁ |
ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ବନ୍ଦ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ 50 μL ଷ୍ଟପ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ଯୋଡନ୍ତୁ |
8. ମାଇକ୍ରୋପ୍ଲେଟ୍ ରିଡର୍ ରେ ଅବଶୋଷଣକୁ 10 ମିନିଟ୍ ମଧ୍ୟରେ 450 nm ରେ ପ Read ଼ନ୍ତୁ (ଆନୁଷଙ୍ଗିକ ପରି 630nm |
ଉଚ୍ଚ ସଠିକତା କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ପାଇଁ ସୁପାରିଶ କରାଯାଇଛି) |
