SARS-CoV-2 nøytraliserende antistoffdeteksjonssett (ELISA)
【TILTENKT BRUK】
SARS-CoV-2 nøytraliserende antistoffdeteksjonssett er en ELISA (competitive enzyme-linked immunosorbent assay) beregnet for kvalitativ og semikvantitativ påvisning av totalt nøytraliserende antistoffer mot SARS-CoV-2 i humant serum og plasma. SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit kan brukes som et hjelpemiddel for å identifisere individer med en adaptiv immunrespons på SARS-CoV-2, noe som indikerer nylig eller tidligere infeksjon. SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit skal ikke brukes til å diagnostisere akutt SARS-CoV-2-infeksjon.
【INTRODUKSJON】
Koronavirusinfeksjoner induserer vanligvis nøytraliserende antistoffresponser. Serokonversjonsratene hos COVID-19-pasienter er henholdsvis 50 % og 100 % på dag 7 og 14 etter symptomdebut. For å presentere kunnskap, er tilsvarende virusnøytraliserende antistoff i blod anerkjent som et mål for å bestemme antistoffeffektivitet og høyere konsentrasjon av det nøytraliserende antistoffet indikerer høyere beskyttelseseffektivitet. Plaque Reduction Neutralization Test (PRNT) har blitt anerkjent som gullstandarden for påvisning av nøytraliserende antistoffer. På grunn av lav gjennomstrømning og høyere krav til drift, er PRNT imidlertid ikke praktisk for storskala serodiagnose og vaksinevaluering. SARS-CoV-2 nøytraliserende antistoffdeteksjonssett er basert på ELISA-metodikk (Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), som kan oppdage det nøytraliserende antistoffet i blodprøven samt få tilgang til konsentrasjonsnivåene til denne typen antistoffer.
【Testprosedyre】
1. I separate rør, alikvoter 120 μL av den tilberedte hACE2-HRP-løsningen.
2. Tilsett 6 μL kalibratorer, ukjente prøver, kvalitetskontroller i hvert rør og bland godt.
3. Overfør 100 μL av hver blanding tilberedt i trinn 2 til tilsvarende mikroplatebrønner i henhold til forhåndsdesignet testkonfigurasjon.
3. Dekk platen med Plate Sealer og inkuber ved 37°C i 60 minutter.
4. Fjern plateforseglingen og vask platen med ca. 300 μL 1× vaskeløsning per brønn i fire ganger.
5. Bank platen på et papirhåndkle for å fjerne væskerester i brønnene etter vasketrinn.
6. Tilsett 100 μL TMB-løsning til hver brønn og inkuber platen i mørke ved 20 – 25 °C i 20 minutter.
7. Tilsett 50 μL stoppløsning til hver brønn for å stoppe reaksjonen.
8. Les av absorbansen i mikroplateleseren ved 450 nm innen 10 minutter (630 nm som tilbehør anbefales for høyere presisjonsytelse.
