SARS-CoV-2 neutraliserende antilichaamdetectiekit (ELISA)
【BEOOGD GEBRUIK】
SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit is een Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) bedoeld voor kwalitatieve en semi-kwantitatieve detectie van totaal neutraliserende antilichamen tegen SARS-CoV-2 in menselijk serum en plasma. De SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit kan worden gebruikt als hulpmiddel bij het identificeren van personen met een adaptieve immuunrespons op SARS-CoV-2, wat wijst op een recente of eerdere infectie. De SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit mag niet worden gebruikt om een acute SARS-CoV-2-infectie te diagnosticeren.
【INVOERING】
Coronavirusinfecties veroorzaken doorgaans neutraliserende antilichaamreacties. De seroconversiepercentages bij COVID-19-patiënten zijn respectievelijk 50% en 100% op dag 7 en 14 na het optreden van de symptomen. Voor zover bekend wordt het overeenkomstige virusneutraliserende antilichaam in bloed erkend als doelwit voor het bepalen van de werkzaamheid van antilichamen, en een hogere concentratie van het neutraliserende antilichaam duidt op een hogere beschermingswerkzaamheid. Plaque Reduction Neutralization Test (PRNT) wordt erkend als de gouden standaard voor het detecteren van neutraliserende antilichamen. Vanwege de lage doorvoer en de hogere vereisten voor operatie is PRNT echter niet praktisch voor grootschalige serodiagnose en vaccinevaluatie. De SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit is gebaseerd op de Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)-methodologie, die het neutraliserende antilichaam in een bloedmonster kan detecteren en speciaal toegang heeft tot de concentratieniveaus van dit type antilichaam.
【Testprocedure】
1. Voeg in afzonderlijke buisjes 120 μl van de bereide hACE2-HRP-oplossing toe.
2. Voeg 6 μl kalibrators, onbekende monsters en kwaliteitscontroles toe aan elke buis en meng goed.
3. Breng 100 μl van elk mengsel dat in stap 2 is bereid, over naar de overeenkomstige microtiterplaatwells volgens de vooraf ontworpen testconfiguratie.
3. Bedek de plaat met Plate Sealer en incubeer gedurende 60 minuten bij 37°C.
4. Verwijder de Plate Sealer en was de plaat vier keer met ongeveer 300 μl 1× wasoplossing per well.
5. Tik de plaat op een papieren handdoek om de resterende vloeistof in de wells na de wasstappen te verwijderen.
6. Voeg 100 μl TMB-oplossing toe aan elk putje en incubeer de plaat gedurende 20 minuten in het donker bij 20 – 25 °C.
7. Voeg 50 μl stopoplossing toe aan elk putje om de reactie te stoppen.
8.Lees de absorptie af in de microplaatlezer bij 450 nm binnen 10 minuten (630 nm als accessoire wordt aanbevolen voor hogere precisieprestaties).
