SARS-CoV-2 न्यूट्रलाइजिङ एन्टिबडी डिटेक्शन किट (ELISA)
【अभिप्रेत प्रयोग】
SARS-CoV-2 न्यूट्रलाइजिङ एन्टिबडी डिटेक्शन किट एक प्रतिस्पर्धात्मक इन्जाइम-लिंक गरिएको इम्युनोसर्बेन्ट एसे (ELISA) हो जुन मानव सीरम र प्लाज्मामा SARS-CoV-2 को कुल तटस्थ एन्टिबडीहरूको गुणात्मक र अर्ध-मात्रात्मक पत्ता लगाउनको लागि हो। SARS- CoV-2 न्यूट्रलाइजिङ एन्टिबडी डिटेक्शन किटलाई SARS- CoV-2 को लागि अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया भएका व्यक्तिहरूलाई पहिचान गर्न मद्दतको रूपमा प्रयोग गर्न सकिन्छ, जसले भर्खरको वा पहिलेको संक्रमणलाई संकेत गर्दछ। SARS-CoV-2 Neutralizing एन्टिबडी पत्ता लगाउने किट तीव्र SARS-CoV-2 संक्रमणको निदान गर्न प्रयोग गर्नु हुँदैन।
【परिचय】
कोरोनाभाइरस संक्रमणहरूले सामान्यतया एन्टिबडी प्रतिक्रियाहरूलाई निष्प्रभावी बनाउँदछ। COVID-19 बिरामीहरूमा सेरोकन्भर्सन दरहरू क्रमशः 7 र 14 पछि लक्षण सुरु भएको दिनमा 50% र 100% छन्। ज्ञान प्रस्तुत गर्नको लागि, रगतमा एन्टिबडीलाई एन्टिबडीलाई तटस्थ गर्ने अनुरूप भाइरसलाई एन्टिबडी प्रभावकारिता निर्धारण गर्न लक्ष्यको रूपमा मान्यता दिइन्छ र तटस्थ एन्टिबडीको उच्च एकाग्रताले उच्च सुरक्षा प्रभावकारितालाई संकेत गर्दछ। प्लाक रिडक्सन न्यूट्रलाइजेशन टेस्ट (पीआरएनटी) लाई न्यूट्रलाइजिङ एन्टिबडीहरू पत्ता लगाउनको लागि सुनको मापदण्डको रूपमा मान्यता दिइएको छ। यद्यपि, यसको कम थ्रुपुट र सञ्चालनको लागि उच्च आवश्यकताको कारण, PRNT ठूलो मात्रामा सेरोडाग्नोसिस र खोप मूल्याङ्कनका लागि व्यावहारिक छैन। SARS-CoV-2 न्यूट्रलाइजिङ एन्टिबडी डिटेक्शन किट प्रतिस्पर्धात्मक इन्जाइम-लिङ्क्ड इम्युनोसर्बेन्ट एसे (ELISA) पद्धतिमा आधारित छ, जसले रगतको नमूनामा न्यूट्रलाइजिङ एन्टिबडी पत्ता लगाउन सक्छ र विशेष रूपमा यस प्रकारको एन्टिबडीको एकाग्रता स्तरहरूमा पहुँच गर्न सक्छ।
【परीक्षण प्रक्रिया】
1. छुट्टाछुट्टै ट्यूबहरूमा, तयार गरिएको hACE2-HRP समाधानको एलीकोट 120μL।
2. प्रत्येक ट्यूबमा 6 μL क्यालिब्रेटरहरू, अज्ञात नमूनाहरू, गुणस्तर नियन्त्रणहरू थप्नुहोस् र राम्ररी मिलाउनुहोस्।
3. चरण 2 मा तयार गरिएको प्रत्येक मिश्रणको 100μL पूर्वनिर्धारित परीक्षण कन्फिगरेसन अनुसार सम्बन्धित माइक्रोप्लेट कुवाहरूमा स्थानान्तरण गर्नुहोस्।
3. प्लेटलाई प्लेट सिलरले छोप्नुहोस् र 60 मिनेटको लागि 37 डिग्री सेल्सियसमा इन्क्युबेट गर्नुहोस्।
4. प्लेट सीलर हटाउनुहोस् र प्लेटलाई 1× धुने समाधानको लगभग 300 μL प्रति राम्रोसँग चार पटक धुनुहोस्।
5. धुने चरणहरू पछि इनारहरूमा अवशिष्ट तरल हटाउन कागजको तौलियामा प्लेट ट्याप गर्नुहोस्।
6. प्रत्येक इनारमा 100 μL TMB समाधान थप्नुहोस् र 20 मिनेटको लागि 20 - 25 डिग्री सेल्सियसमा प्लेटलाई अँध्यारोमा इन्क्युब्याट गर्नुहोस्।
7. प्रतिक्रिया रोक्न प्रत्येक कुवामा 50 μL स्टप समाधान थप्नुहोस्।
8. 10 मिनेट भित्र 450 nm मा माइक्रोप्लेट रिडरमा अवशोषण पढ्नुहोस् (उच्च सटीक प्रदर्शनको लागि सहायकको रूपमा 630nm सिफारिस गरिन्छ।
