SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit (ELISA)
【စာမူ】
SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit သည် ယှဉ်ပြိုင်နိုင်သော ELISA နည်းစနစ်ကို အခြေခံထားသည်။
သန့်စင်ထားသော receptor binding domain (RBD)၊ ဗိုင်းရပ်စ် spike (S) ပရိုတင်းနှင့် လက်ခံဆဲလ်များမှ ပရိုတင်းများကို အသုံးပြုခြင်း
receptor ACE2၊ ဤစမ်းသပ်မှုသည် ဗိုင်းရပ်စ်-အိမ်ရှင်ကြားရှိ အပြန်အလှန်ထိန်းညှိမှုကို အတုယူရန် ဒီဇိုင်းထုတ်ထားသည်။
ချိန်ညှိကိရိယာများ၊ အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှုများ၊ နှင့် သွေးရည်ကြည် သို့မဟုတ် ပလာစမာနမူနာများကို ဖျန်ဖြေရာတွင် ကောင်းမွန်စွာ ရောစပ်ထားသည်။
hACE2-HRP conjugate ပါရှိသော ကြားခံကို ပြွန်ငယ်များတွင် ခွဲထားသည်။ထို့နောက်အရောအနှောများကိုလွှဲပြောင်း
SARS-CoV-2 RBD အပိုင်း (RBD) ပါဝင်သော မိုက်ခရိုပလိတ်တွင်းများ
ပေါက်ဖွားခြင်း။မိနစ် 30 ပေါက်ဖွားစဉ်အတွင်း၊ ချိန်ညှိကိရိယာများရှိ RBD သီးသန့်ပဋိပစ္စည်း၊ QC နှင့်
နမူနာများသည် ရေတွင်းများတွင် RBD ကို ချုပ်နှောင်ထားသော သီးခြား ချည်နှောင်မှုအတွက် hACE2-HRP နှင့် ယှဉ်ပြိုင်မည်ဖြစ်သည်။ပြီးနောက်
incubation တွင် unbound hACE2-HRP conjugate ကိုဖယ်ရှားရန်ရေတွင်းများကို 4 ကြိမ်ဆေးကြောပါ။အဖြေတစ်ခု
ထို့နောက် TMB ကို အခန်းအပူချိန်တွင် မိနစ် 20 မျှ ပေါင်းထည့်ကာ ပေါက်ဖွားလာကာ ကြီးထွားမှုကို ဖြစ်ပေါ်စေသည်။
အပြာရောင်။1N HCl ဖြည့်စွက်ခြင်းဖြင့် အရောင်ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုကို ရပ်တန့်လိုက်ပြီး စုပ်ယူမှုမှာ ရပ်တန့်သွားသည်။
450 nm တွင် spectrophotometrically တိုင်းတာသည်။အရောင်ဖွဲ့စည်းပုံ၏ပြင်းထန်မှုအချိုးကျသည်။
ပစ္စုပ္ပန်အင်ဇိုင်းပမာဏနှင့် တူညီသောနည်းလမ်းဖြင့် တိုင်းတာထားသော စံချိန်စံညွှန်းပမာဏနှင့် ပြောင်းပြန်ဆက်စပ်နေသည်။
ထောက်ပံ့ပေးထားသော calibrators များဖြင့် ဖွဲ့စည်းထားသော ကိုက်ညှိမျဉ်းကွေးနှင့် နှိုင်းယှဉ်ခြင်းအားဖြင့် အာရုံစူးစိုက်မှု
ထို့နောက် အမည်မသိနမူနာရှိ ပဋိပစ္စည်းများ ပျက်ပြယ်စေခြင်းကို တွက်ချက်သည်။
【ပစ္စည်းများ လိုအပ်သော်လည်း မပေးထားပါ။】
1. ပေါင်းခံရည် သို့မဟုတ် အိုင်းယွန်းပြုလုပ်ထားသောရေ
2. တိကျသောပိုက်လိုင်းများ- 10μL၊ 100μL၊200μL နှင့် 1 mL
3. တစ်ခါသုံးပိုက်လိုင်းအကြံပြုချက်များ
4. Microplate reader သည် 450nm တွင် စုပ်ယူမှုအား ဖတ်ရှုနိုင်စွမ်းရှိသည်။
5. စုပ်စက္ကူ
6. ဂရပ်စာရွက်
7. Vortex mixer သို့မဟုတ် ညီမျှသည်။
【နမူနာစုဆောင်းမှုနှင့် သိုလှောင်မှု】
1. K2-EDTA ပါရှိသော ပြွန်များတွင် စုဆောင်းထားသော သွေးရည်ကြည်နှင့် ပလာစမာနမူနာများကို ဤကိရိယာအတွက် အသုံးပြုနိုင်သည်။
2. နမူနာများကို ဖုံးအုပ်ထားသင့်ပြီး စစ်ဆေးမှုမပြုလုပ်မီ 2°C - 8°C တွင် 48 နာရီအထိ သိမ်းဆည်းထားနိုင်သည်။
အချိန်ပိုကြာအောင် ထိန်းသိမ်းထားသော နမူနာများကို (၆ လအထိ) မစစ်ဆေးမီ -20°C တွင် တစ်ကြိမ်သာ အေးခဲထားသင့်သည်။
ထပ်ခါတလဲလဲ အေးခဲနေသော သံသရာကို ရှောင်ပါ။
ပရိုတိုကော
【ဓာတ်ကူပစ္စည်းပြင်ဆင်ခြင်း။】
1. ဓါတ်ဆေးအားလုံးကို ရေခဲသေတ္တာမှ ထုတ်ယူပြီး အသုံးမပြုမီ အခန်းအပူချိန်သို့ ပြန်ခွင့်ပြုပါ။
(20° မှ 25°C)။အသုံးပြုပြီးပါက ရေခဲသေတ္တာထဲတွင် ဓာတ်ပစ္စည်းများအားလုံးကို ချက်ချင်းသိမ်းဆည်းပါ။
2. နမူနာများနှင့် ထိန်းချုပ်မှုများကို အသုံးမပြုမီ vortexed လုပ်သင့်သည်။
3. hACE2-HRP ဖြေရှင်းချက်ပြင်ဆင်မှု- hACE2-HRP အာရုံစူးစိုက်မှုကို 1:51 ပျော့ပျောင်းမှုအချိုးဖြင့် ပျော့ပျောင်းစေခြင်း
ကြားခံ။ဥပမာအားဖြင့်၊ HACE2-HRP အာရုံစူးစိုက်မှု 100 μL ကို HRP Dilution Buffer ၏ 5.0mL ဖြင့် ဖျန်းပေးပါ။
hACE2-HRP ဖြေရှင်းချက်ကို ပြုလုပ်ပါ။
4. 1× Wash Solution Preparation- 20× Wash Solution ကို deionised သို့မဟုတ် ပေါင်းခံရေဖြင့် အအေးခံပြီး ဖျော်ထားပါ။
ထုထည်အချိုးအစား 1:19 ။ဥပမာအားဖြင့်၊ 20× Wash Solution ၏ 20 mL ကို deionized သို့မဟုတ် 380 mL ဖြင့် အအေးခံပါ။
ပေါင်းခံရေ 400 mL ကို 1× Wash Solution ပြုလုပ်ရန်။
【စမ်းသပ်မှုလုပ်ထုံးလုပ်နည်း】
1. သီးခြားပြွန်များတွင်၊ ပြင်ဆင်ထားသော hACE2-HRP ဖြေရှင်းချက်၏ 120μL ကို aliquot ။
2. 6 μL ချိန်ညှိကိရိယာများ၊ အမည်မသိနမူနာများ၊ အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှုများကို ပြွန်တစ်ခုစီတွင် ထည့်ပြီး ကောင်းစွာရောမွှေပါ။
3. အဆင့် 2 တွင် ပြင်ဆင်ထားသော အရောအနှောတစ်ခုစီ၏ 100μL ကို သက်ဆိုင်ရာ မိုက်ခရိုပလိတ်တွင်းများထဲသို့ လွှဲပြောင်းပါ။
ကြိုတင်ဒီဇိုင်းရေးဆွဲထားသော စမ်းသပ်ဖွဲ့စည်းမှုသို့။
3. ပန်းကန်ပြားကို Plate Sealer ဖြင့် ဖုံးအုပ်ပြီး 37°C တွင် မိနစ် 30 ကြာ ဖုတ်ပါ။
4. Plate Sealer ကို ဖယ်ရှားပြီး ရေတွင်းတစ်ခုလျှင် 1× Wash Solution 300 μL ခန့်ဖြင့် ပန်းကန်ပြားကို လေးကြိမ်ခန့် ဆေးကြောပါ။
5. ဆေးကြောပြီးနောက် ရေတွင်းရှိ ကျန်အရည်များကို ဖယ်ရှားရန် စက္ကူသုတ်ပုဝါပေါ်တွင် ပန်းကန်ပြားကို နှိပ်ပါ။
6. ရေတွင်းတစ်ခုစီတွင် TMB Solution 100 μL ထည့်ပြီး ပန်းကန်ပြားကို အမှောင်ထဲတွင် 20 - 25°C တွင် မိနစ် 20 ခန့်ထားပါ။
7. တုံ့ပြန်မှုကိုရပ်တန့်ရန် ရေတွင်းတစ်ခုစီတွင် Stop Solution 50 μL ကိုထည့်ပါ။
8. Microplate reader တွင် 10 မိနစ်အတွင်း 450 nm တွင် စုပ်ယူမှုကို ဖတ်ပါ (ဆက်စပ်ပစ္စည်းအဖြစ် 630nm
ပိုမိုတိကျသောစွမ်းဆောင်ရည်အတွက် အကြံပြုထားသည်။)
