SARS-Cov-2 ပ antib ိပစ္စည်းကိုထောက်လှမ်းရေးကိရိယာ (Elisa)
【အခေြခံမူ】
SARS-Cov-2 interbody detection kit burnerizing antibody ရှာဖွေတွေ့ရှိမှုကိရိယာအစုံအရ elisa နည်းစနစ်အပေါ်အခြေခံသည်။
ဗိုင်းရပ်စ်ဆံ့ဆံ့ပရိုတိန်းနှင့်အိမ်ရှင်ဆဲလ်များမှစင်ကြယ်သော receptor binding domain (rbd), ပရိုတိန်းကိုအသုံးပြုခြင်း
receptor Ace2, ဒီစမ်းသပ်မှုကဗိုင်းရပ်စ်အိမ်ရှင်ကိုကြားနေတဲ့အပြန်အလှန်ဆက်သွယ်မှုကိုတုပရန်ဒီဇိုင်းပြုလုပ်ထားသည်။
စံကိုက်ညှိနှိုင်းခြင်း, အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှုများနှင့်သွေးရည်ကြည်သို့မဟုတ်ပလာစမာနမူနာများကို dilution တွင်ကောင်းစွာရောထွေးသည်
သေးငယ်တဲ့ပြွန်များတွင် hace2-hrp conjugation ပါဝင်သောကြားခံ။ ထိုအခါအရောအနှောပြောင်းရွှေ့နေကြသည်
ရွေ့လျားနေသော SAV-2 RBD အပိုင်းအစများ (RBD) ပါရှိသော Microplate Wells
ပေါက်ဖွား။ မိနစ် 30 ကြာပေါက်ဖွားစဉ်အတွင်း, စံကိုက်ညှိနှိုင်းမှုအတွက် RBD တိကျသောပ antib ိပစ္စည်းနှင့်
နမူနာများကိုရေတွင်းများတွင်ရွေ့လျားနေသော RBD ကိုသတ်သတ်မှတ်မှတ်ချည်နှောင်ထားသောတိကျသောချည်နှောင်ခြင်းအတွက် Hace2-HRP နှင့်ယှဉ်ပြိုင်မည်ဖြစ်သည်။ နောက်ကျသော
ထိုပေါက်ဖွားမှုတွင်ရေတွင်းများကို unbole2-hrp conjugation ဖယ်ရှားရန် 4 ကြိမ်ဆေးကြောခဲ့သည်။ တစ် ဦး အဖြေတစ်ခု
TMB ကိုအခန်းအပူချိန်တွင်မိနစ် 20 ခန့်ထည့်သွင်းထားပြီး,
အပြာရောင်အရောင်။ အရောင်ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုကို 1n HCL ၏ထို့အပြင်နှင့်အတူရပ်တန့်ခြင်းနှင့်စုပ်ယူမှုဖြစ်ပါတယ်
450 NM မှာတိုင်းတာတိုင်းတာသည်။ ဖွဲ့စည်းအရောင်၏ပြင်းထန်မှုအချိုးကျအချိုးကျဖြစ်ပါတယ်
ပစ္စုပ္ပန်အင်ဇိုင်းပမာဏနှင့်အတူတူပင်လမ်းအတွက် assayed စံချိန်စံညွှန်းပမာဏနှင့်ဆက်စပ်သောဖြစ်ပါတယ်။
ပေးထားသောစံကိုက်ညှိနှိုင်းခြင်းဖြင့်ဖွဲ့စည်းထားသောစံကိုက်ညှိကုသမှုနှင့်နှိုင်းယှဉ်ခြင်းမှတဆင့်) ၏အာရုံစူးစိုက်မှု
အမည်မသိနမူနာတွင်ပ antib ိပစ္စည်းများကိုပျက်ပြားစေနိုင်သည်။
【လိုအပ်သောပစ္စည်းများလိုအပ်ပေမယ့်မထောက်ပံ့ပါ】
1 ။ ရေစက်သို့မဟုတ် deionized ရေ
2 ။ တိကျစွာ pipettes: 10μl, 100μl, 200μlနှင့် 1 ml
3 ။ တစ်ခါသုံး pipette အကြံပြုချက်များ
4 ။ Microplate စာဖတ်သူကို 450nm တွင်စုပ်ယူနိုင်စွမ်းကိုဖတ်နိုင်စွမ်း။
5 ။ စုပ်ယူသောစက္ကူ
6 ။ ဂရပ်စာရွက်
7 ။ Vortex ရောနှောသို့မဟုတ်နှင့်ညီမျှ
【နမူနာစုဆောင်းခြင်းနှင့်သိုလှောင်မှု】
1 ။ K2-EDTA ပါဝင်သောပြွန်များတွင်စုဆောင်းထားသောသွေးရည်ကြည်နှင့်ပလာစမာနမူနာများကိုဤကိရိယာအတွက်အသုံးပြုနိုင်သည်။
2 ။ နမူနာများကိုအရံထားသင့်ပြီး 48 နာရီအထိ 2 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင် 2 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင်သိုလှောင်ထားသင့်သည်။
အချိန်ကြာမြင့်စွာကျင်းပသောနမူနာ (6 လအထိ) ကိုတစ်ကြိမ်သာဖြင့်တစ်ကြိမ်တည်းသာလျှင်တစ်ကြိမ်တည်းသာအေးခဲစေသင့်သည်။
ထပ်ခါတလဲလဲအေးခဲ - သော်သံကြိုးကိုရှောင်ကြဉ်ပါ။
တည်ဆောက်မှု
【ဓါတ်ကူပစ္စည်းပြင်ဆင်မှု】
1 ။ အားလုံး Reagents အားလုံးရေခဲသေတ္တာကနေထုတ်ယူရမည်ဖြစ်ပြီးအသုံးမပြုမီအခန်းအပူချိန်သို့ပြန်သွားရန်ခွင့်ပြုရမည်
(20 °မှ 25 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်) ။ အသုံးပြုမှုပြီးနောက်ချက်ချင်း Reagents အားလုံးကိုရေခဲသေတ္တာထဲတွင်သိမ်းဆည်းပါ။
2 ။ နမူနာများနှင့်ထိန်းချုပ်မှုများသည်မသုံးမီရေဝဲပါ။
3 ။ HACH2-HRP ဖြေရှင်းချက်ပြင်ဆင်မှု: Dilute Hace2-HRP က 1: 51 dilution အချိုးကို dilution နှင့်အတူအာရုံစူးစိုက်
ကြားခံ။ ဥပမာအားဖြင့်, HRP dilution buffer ၏ 5.0ml ကို drote2-hrp ၏ 100 μlကို drole 100 μl
တစ် ဦး Hace2-HRP ဖြေရှင်းချက်လုပ်ပါ။
4 ။ 1 ×ဆေးကြဲသောဖြေရှင်းနည်းပြင်ဆင်မှုပြင်ဆင်ခြင်း - 20 × 4 င်းတို့ကို deionized သို့မဟုတ်ရေဖြည့်ရေနှင့်အတူရေသောက်ပါ
1:19 ၏အချိုးအစားအချိုး။ ဥပမာအားဖြင့် 20 ml 20 ml ကို dloute 20 ml deionized သို့မဟုတ် deionized သို့မဟုတ် 380 ml နှင့်အတူဆေးကြောပါဖြေရှင်းချက်
1 ×ဆေးကြောသန့်ဖြေရှင်းချက် 400 မီလီမီတာကိုပြုလုပ်ရန်ရေဖြန်းရေ။
【စမ်းသပ်မှုလုပ်ထုံးလုပ်နည်း】
1 ။ သီးခြားပြွန်များတွင်ပြင်ဆင်ထားသော Hace2-HRP ဖြေရှင်းချက်၏120μl။
2 ။ ခပ်သိမ်းတစ်ခုချင်းစီတွင်မပါ 0 င်သောစံကိုက်မှု 6 μlကိုထည့်ပါ။
3 ။ အရောအနှောတစ်ခုချင်းစီ၏100μltureတစ်ခုစီကိုအဆင့် 2 တွင်အသင့်တော်သော microplate ရေတွင်းများသို့အသင့်တော်အတိုင်းပြင်ဆင်ထားသည်
ကြိုတင်သတ်မှတ်ထားသောစမ်းသပ် configuration ကိုရန်။
3 ။ ပန်းကန်ကိုပုလင်းတံဆိပ်ဖြင့်ဖုံးအုပ်ထားပါ။ 37 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင်မိနစ် 30 တွင်ထည့်ပါ။
4 ။ Plate Sealer ကိုဖယ်ရှားပြီး 1 ×ဆေးကြောခြင်း 300 μlကို 300 × 300 μlပါသောပန်းကန်ကိုဆေးကြောပါ။
5 ။ ရေတွင်းများကိုအဝတ်လျှော်ပြီးနောက်ရေတွင်းများတွင်ကျန်ရှိနေသေးသောရေတွင်းများကိုဖယ်ရှားရန်စက္ကူပုဝါပေါ်ရှိပန်းကန်ပေါ်တွင်အသာပုတ်ပါ။
6 ။ တစ် ဦး ချင်းစီအတွက် TMB ဖြေရှင်းချက် 100 μlထည့်ပါ။ မိနစ် 20 မှ 25 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင်မိနစ် 20 တွင်အမှောင်တွင်ထည့်ပါ။
7 ။ တုံ့ပြန်မှုကိုရပ်တန့်ရန်တစ် ဦး ချင်းစီ၏တစ် ဦး ချင်းစီ၏ကောင်းစွာတစ် ဦး ချင်းစီ၏ခြေလျင်ဖြေရှင်းချက်၏ 50 μlထည့်ပါ။
8 ။ Microplate Reader တွင် Microplate Reader တွင် 10 မိနစ်အတွင်း (630nm) တွင် (630nm) တွင် Microplate Reader တွင်စုပ်ယူမှုကိုဖတ်ပါ
ပိုမိုမြင့်မားသောတိကျစွာစွမ်းဆောင်ရည်အတွက်အကြံပြုသည်) ။