एसएआरएस-सीओव्ही -2 तटस्थ अँटीबॉडी डिटेक्शन किट (एलिसा)
【तत्त्व】
एसएआरएस-सीओव्ही -2 तटस्थ अँटीबॉडी डिटेक्शन किट स्पर्धात्मक एलिसा कार्यपद्धतीवर आधारित आहे.
शुद्ध रिसेप्टर बाइंडिंग डोमेन (आरबीडी), व्हायरल स्पाइक (एस) प्रथिने आणि होस्ट सेलचा प्रथिने वापरणे
रिसेप्टर एसीई 2, ही चाचणी व्हायरस-होस्ट तटस्थ संवादाची नक्कल करण्यासाठी डिझाइन केली गेली आहे.
कॅलिब्रेटर, गुणवत्ता नियंत्रणे आणि सीरम किंवा प्लाझ्मा नमुने स्वतंत्रपणे सौम्यतेत चांगले मिसळले जातात
लहान ट्यूबमध्ये एचएसीई 2-एचआरपी कॉन्जुगेट असलेले बफर. मग मिश्रण हस्तांतरित केले जाते
फॉर इमोबिलाइज्ड रिकॉम्बिनेंट एसएआरएस-सीओव्ही -2 आरबीडी फ्रेगमेंट (आरबीडी) असलेल्या मायक्रोप्लेट विहिरी
उष्मायन. 30 मिनिटांच्या उष्मायन दरम्यान, कॅलिब्रेटर, क्यूसी आणि मधील आरबीडी विशिष्ट प्रतिपिंडे
विहिरींमध्ये आरबीडीला विशिष्ट बंधनकारक करण्यासाठी नमुने एचएसीई 2-एचआरपीशी स्पर्धा करतील. नंतर
उष्मायन, विहिरी अनबाऊंड एचएसीई 2-एचआरपी संयुगेट काढण्यासाठी 4 वेळा धुतल्या जातात. चे समाधान
त्यानंतर टीएमबी जोडले जाते आणि खोलीच्या तपमानावर 20 मिनिटे उष्मायित केले जाते, परिणामी ए च्या विकासाचा परिणाम होतो
निळा रंग. रंग विकास 1 एन एचसीएलच्या व्यतिरिक्त थांबविला जातो आणि शोषण आहे
450 एनएम वर स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिकली मोजले. तयार झालेल्या रंगाची तीव्रता प्रमाणित आहे
उपस्थित सजीवांच्या शरीरात निर्मार्ण होणारे द्रव्य रक्कम आणि त्याच प्रकारे आकारलेल्या मानकांच्या प्रमाणात विपरित संबंधित आहे.
प्रदान केलेल्या कॅलिब्रेटरद्वारे तयार केलेल्या कॅलिब्रेशन वक्रांशी तुलना करून, एकाग्रता
अज्ञात नमुन्यात प्रतिपिंडे तटस्थ करणे नंतर गणना केली जाते.
【सामग्री आवश्यक परंतु प्रदान केलेली नाही】
1. डिस्टिल्ड किंवा डीओनाइज्ड वॉटर
2. प्रेसिजन पाइपेट्स: 10μl, 100μl, 200μl आणि 1 मिली
3. डिस्पोजेबल पिपेट टिप्स
4. मायक्रोप्लेट रीडर 450 एनएम वर वाचन करण्यास सक्षम आहे.
5. शोषक कागद
6. आलेख पेपर
7. व्हर्टेक्स मिक्सर किंवा समकक्ष
【नमुना संग्रह आणि संचयन】
1. के 2-ईडीटीए असलेल्या ट्यूबमध्ये गोळा केलेले सीरम आणि प्लाझ्मा नमुने या किटसाठी वापरले जाऊ शकतात.
2. नमुने कॅप्ड केले पाहिजेत आणि 48 तासांपर्यंत 2 डिग्री सेल्सियस - 8 डिग्री सेल्सिअस तापमानात साठवले जाऊ शकतात.
जास्त काळ (6 महिन्यांपर्यंत) असलेले नमुने परख होण्यापूर्वी -20 डिग्री सेल्सिअस तापमानात एकदाच गोठवावे.
वारंवार फ्रीझ-पिघलणारी चक्र टाळा.
प्रोटोकॉल
【अभिकर्मक तयारी】
1. सर्व अभिकर्मकांना रेफ्रिजरेशनमधून बाहेर काढले जाणे आवश्यक आहे आणि वापरण्यापूर्वी खोलीच्या तपमानावर परत जाण्याची परवानगी दिली पाहिजे
(20 ° ते 25 डिग्री सेल्सियस). रेफ्रिजरेटरमध्ये सर्व अभिकर्मक वापरल्यानंतर त्वरित जतन करा.
2. सर्व नमुने आणि नियंत्रणे वापरण्यापूर्वी भोवरा असाव्यात.
3. एचएसीई 2-एचआरपी सोल्यूशनची तयारी: सौम्यतेसह 1: 51 डिल्युशन रेशोवर एचएसीई 2-एचआरपी पातळ करा
बफर. उदाहरणार्थ, एचएसीई 2-एचआरपीचे 100 μl Lication 5.0ml एचआरपी डिल्युशन बफरसह केंद्रित करा
HACE2-HRP सोल्यूशन बनवा.
4. 1 × वॉश सोल्यूशनची तयारी: 20 × वॉश सोल्यूशन डीओनाइज्ड किंवा डिस्टिल्ड वॉटरसह सौम्य करा
1:19 चे खंड प्रमाण. उदाहरणार्थ, 20 एमएल 20 × वॉश सोल्यूशनचे 380 मिली डीओनाइज्ड किंवा
1 × वॉश सोल्यूशनचे 400 मिली तयार करण्यासाठी डिस्टिल्ड वॉटर.
【चाचणी प्रक्रिया】
1. स्वतंत्र ट्यूबमध्ये, तयार केलेल्या एचएसीई 2-एचआरपी सोल्यूशनचे iqu लिकॉट 120μl.
2. कॅलिब्रेटरचे 6 μl जोडा, अज्ञात नमुने, प्रत्येक ट्यूबमध्ये गुणवत्ता नियंत्रणे आणि चांगले मिसळा.
3. चरण 2 मध्ये तयार केलेल्या प्रत्येक मिश्रणाचे 100μl संबंधित मायक्रोप्लेट विहिरींमध्ये त्यानुसार ट्रान्सफर करा
चाचणी कॉन्फिगरेशनच्या पूर्वसूचना.
3. प्लेट सीलरसह प्लेट झाकून ठेवा आणि 30 मिनिटांसाठी 37 डिग्री सेल्सिअस तापमानात घाला.
4. प्लेट सीलर काढा आणि प्लेटला चार वेळा वेलसाठी अंदाजे 300 μl 1 × वॉश सोल्यूशनसह धुवून घ्या.
.
6. प्रत्येक विहिरीमध्ये 100 μL टीएमबी सोल्यूशन घाला आणि 20 मिनिटांसाठी 20 - 25 डिग्री सेल्सियस तापमानात प्लेट घाला.
7. प्रतिक्रिया थांबविण्यासाठी प्रत्येक विहिरीमध्ये 50 μl स्टॉप सोल्यूशन जोडा.
8. मायक्रोप्लेट रीडरमधील शोषण 10 मिनिटांत 450 एनएम वर वाचा (ory क्सेसरीसाठी 630 एनएम
उच्च अचूक कामगिरीसाठी शिफारस केलेले).