SARS-CoV-2 न्यूट्रलायझिंग अँटीबॉडी डिटेक्शन किट (ELISA)

【अभिप्रेत वापर】

SARS-CoV-2 न्यूट्रलायझिंग अँटीबॉडी डिटेक्शन किट एक स्पर्धात्मक एंझाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉर्बेंट ऍसे (ELISA) आहे ज्याचा उद्देश मानवी सीरम आणि प्लाझ्मामध्ये SARS-CoV-2 च्या एकूण तटस्थ प्रतिपिंडांच्या गुणात्मक आणि अर्ध-परिमाणात्मक शोधासाठी आहे. SARS- CoV-2 न्यूट्रलायझिंग अँटीबॉडी डिटेक्शन किटचा वापर SARS- CoV-2 साठी अनुकूल रोगप्रतिकारक प्रतिसाद असलेल्या व्यक्तींना ओळखण्यासाठी मदत म्हणून केला जाऊ शकतो, जो अलीकडील किंवा पूर्वीचा संसर्ग दर्शवतो. SARS-CoV-2 न्यूट्रलायझिंग अँटीबॉडी डिटेक्शन किटचा वापर तीव्र SARS-CoV-2 संसर्गाचे निदान करण्यासाठी केला जाऊ नये.

【परिचय】

कोरोनाव्हायरस संसर्ग सामान्यत: तटस्थ प्रतिपिंड प्रतिसादांना प्रेरित करतात. कोविड-19 रूग्णांमधील सेरोकन्व्हर्जन दर अनुक्रमे 50% आणि 100% आहेत दिवस 7 आणि 14 नंतर लक्षणे सुरू झाली. माहिती सादर करण्यासाठी, रक्तातील संबंधित विषाणू न्यूट्रलायझिंग अँटीबॉडी हे प्रतिपिंड परिणामकारकता निर्धारित करण्यासाठी लक्ष्य म्हणून ओळखले जाते आणि तटस्थ प्रतिपिंडाची उच्च एकाग्रता उच्च संरक्षण प्रभावीता दर्शवते. प्लाक रिडक्शन न्यूट्रलायझेशन टेस्ट (पीआरएनटी) हे तटस्थ प्रतिपिंड शोधण्यासाठी सुवर्ण मानक म्हणून ओळखले जात आहे. तथापि, त्याच्या कमी थ्रूपुटमुळे आणि ऑपरेशनसाठी जास्त आवश्यकतेमुळे, PRNT मोठ्या प्रमाणात सेरोनिदान आणि लस मूल्यांकनासाठी व्यावहारिक नाही. SARS-CoV-2 न्यूट्रलायझिंग अँटीबॉडी डिटेक्शन किट स्पर्धात्मक एंझाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉर्बेंट ऍसे (ELISA) पद्धतीवर आधारित आहे, जी रक्ताच्या नमुन्यातील तटस्थ प्रतिपिंड शोधू शकते तसेच या प्रकारच्या प्रतिपिंडाच्या एकाग्रता पातळीमध्ये विशेष प्रवेश करू शकते.

 【चाचणी प्रक्रिया】

1.वेगळ्या नळ्यांमध्ये, तयार केलेल्या hACE2-HRP सोल्युशनचे 120μL अलिकट.

2.प्रत्येक ट्यूबमध्ये 6 μL कॅलिब्रेटर, अज्ञात नमुने, गुणवत्ता नियंत्रणे जोडा आणि चांगले मिसळा.

3. स्टेप 2 मध्ये तयार केलेल्या प्रत्येक मिश्रणाचे 100μL पूर्वडिझाइन केलेल्या चाचणी कॉन्फिगरेशननुसार संबंधित मायक्रोप्लेट विहिरींमध्ये हस्तांतरित करा.

3. प्लेट सीलरने प्लेट झाकून ठेवा आणि 37°C वर 60 मिनिटे उबवा.

4. प्लेट सीलर काढा आणि प्लेटला अंदाजे 300 μL 1× वॉश सोल्यूशन प्रति विहीर चार वेळा धुवा.

5. पायऱ्या धुतल्यानंतर विहिरींमधील अवशिष्ट द्रव काढून टाकण्यासाठी प्लेटला पेपर टॉवेलवर टॅप करा.

6.प्रत्येक विहिरीला 100 μL TMB द्रावण जोडा आणि प्लेटला 20 - 25°C तापमानात 20 मिनिटे अंधारात उबवा.

7. प्रतिक्रिया थांबवण्यासाठी प्रत्येक विहिरीला 50 μL स्टॉप सोल्युशन जोडा.

8. मायक्रोप्लेट रीडरमध्ये शोषकता 450 nm वर 10 मिनिटांत वाचा (उच्च अचूक कामगिरीसाठी ऍक्सेसरी म्हणून 630nm शिफारस केली जाते.