SARS-CoV-2 саармагжуулах эсрэгбие илрүүлэх хэрэгсэл (ELISA)
【ЗАРЧИМ】
SARS-CoV-2 саармагжуулах эсрэгбие илрүүлэх иж бүрдэл нь өрсөлдөх чадвартай ELISA арга зүйд суурилдаг.
Цэвэршүүлсэн рецепторыг холбох домэйн (RBD), вирусын баяжуулалтын (S) уураг болон хост эсийн уураг ашиглан.
рецептор ACE2, энэ тест нь вирусын хостыг саармагжуулах харилцан үйлчлэлийг дуурайх зорилготой.
Калибратор, Чанарын хяналт, ийлдэс эсвэл сийвэнгийн дээжийг тус тусад нь шингэрүүлээд сайтар хольсон
жижиг хуруу шилэнд хуваасан hACE2-HRP коньюгат агуулсан буфер. Дараа нь хольцыг дотор нь шилжүүлнэ
хөдөлгөөнгүй рекомбинант SARS-CoV-2 RBD фрагмент (RBD) агуулсан микроплит худаг
инкубаци. 30 минутын инкубацийн явцад калибратор дахь RBD өвөрмөц эсрэгбие, QC болон
дээж нь худагт хөдөлгөөнгүй болсон RBD-ийг тусгайлан холбохдоо hACE2-HRP-тэй өрсөлдөх болно. Дараа нь
Инкубацийн дараа цооногийг 4 удаа угааж, холбоогүй hACE2-HRP коньюгатыг зайлуулна. -ийн шийдэл
Дараа нь TMB нэмж, тасалгааны температурт 20 минутын турш өсгөвөрлөхөд a
цэнхэр өнгө. Өнгөний хөгжлийг 1N HCl нэмснээр зогсоож, шингээлт нь байна
450 нм-д спектрофотометрээр хэмжсэн. Үүссэн өнгөний эрч хүч нь пропорциональ байна
байгаа ферментийн хэмжээ бөгөөд ижил аргаар шалгасан стандартын хэмжээтэй урвуу хамааралтай.
Өгөгдсөн калибраторуудын үүсгэсэн шалгалт тохируулгын муруйтай харьцуулах замаар концентраци
дараа нь үл мэдэгдэх дээжинд саармагжуулах эсрэгбиемүүдийг тооцоолно.
【ШААРДЛАГАТАЙ ГЭХДЭЭ ӨГӨӨГҮЙ МАТЕРИАЛ】
1. Нэрмэл буюу ионгүйжүүлсэн ус
2. Нарийвчилсан соруур: 10μL, 100μL, 200μL болон 1 мл
3. Нэг удаагийн пипеткийн үзүүр
4. 450 нм-ийн гэрэл шингээх чадварыг унших чадвартай бичил хавтан уншигч.
5. Шингээгч цаас
6. График цаас
7. Vortex холигч буюу түүнтэй адилтгах
【СОРЖ ЦУГЛУУЛАХ, ХАДГАЛАХ】
1. Энэ хэрэгсэлд K2-EDTA агуулсан хуруу шилэнд цуглуулсан ийлдэс болон плазмын дээжийг ашиглаж болно.
2. Сорьцыг таглах ба шинжилгээ хийхээс өмнө 2-8 °C температурт 48 цаг хүртэл хадгалж болно.
Удаан хугацаагаар (6 сар хүртэл) хадгалсан сорьцыг шинжилгээ хийхээс өмнө зөвхөн нэг удаа -20 хэмд хөлдөөх хэрэгтэй.
Дахин давтагдах хөлдөөх, гэсгээх мөчлөгөөс зайлсхий.
ПРОТОКОЛ
【Урвалж бэлтгэх】
1. Хэрэглэхийн өмнө бүх урвалжийг хөргөгчнөөс гаргаж аваад тасалгааны температурт буцаана
(20 хэмээс 25 хэм хүртэл). Бүх урвалжийг хэрэглэсний дараа нэн даруй хөргөгчинд хадгална.
2. Бүх дээж, хяналтыг хэрэглэхийн өмнө эргүүлнэ.
3. hACE2-HRP уусмал бэлтгэх: hACE2-HRP баяжмалыг 1: 51 харьцаатай шингэрүүлэлтээр шингэлнэ.
Буфер. Жишээлбэл, 100 мкл hACE2-HRP баяжмалыг 5.0 мл HRP шингэлэх буферээр шингэлнэ.
hACE2-HRP уусмал хийх.
4. 1 × угаах уусмал бэлтгэх: 20 × угаалгын уусмалыг ионгүйжүүлсэн эсвэл нэрмэл усаар шингэлнэ.
эзлэхүүний харьцаа 1:19. Жишээлбэл, 20 мл 20 × угаах уусмалыг 380 мл ионгүйжүүлсэн уусмалаар шингэлнэ.
нэрмэл усаар 400 мл 1 × угаах уусмал хийнэ.
【Туршилтын журам】
1. Тусдаа хуруу шилэнд бэлтгэсэн hACE2-HRP уусмалаас 120 мкл хэсгийг хийнэ.
2. Хоолой бүрт 6 мкл калибратор, үл мэдэгдэх дээж, чанарын хяналтыг хийж сайтар холино.
3. 2-р алхамд бэлтгэсэн хольц тус бүрээс 100 мкл-ийг микроплитийн харгалзах нүхэнд хийнэ.
урьдчилан боловсруулсан туршилтын тохиргоонд.
3. Хавтанг битүүмжлэгчээр таглаад 37°С-т 30 минутын турш өсгөвөрлөнө.
4. Хавтан чигжээсийг авч, хавтанг ойролцоогоор 300 мкл 1 × Угаах уусмалаар нэг цооногоор дөрвөн удаа угаана.
5. Угаах үе шатуудын дараа цооногийн үлдэгдэл шингэнийг арилгахын тулд цаасан алчуур дээр таваг товш.
6. Худаг тус бүрт 100 мкл TMB уусмал нэмж, хавтанг харанхуй газар 20 - 25°С-т 20 минутын турш өсгөвөрлөнө.
7. Урвалыг зогсоохын тулд цооног бүрт 50 мкл Stop уусмал нэмнэ.
8. 10 минутын дотор 450 нм долгионы долгионы микроплит уншигчийн шингээлтийг уншина уу (дагалдах хэрэгсэл бол 630 нм).
илүү өндөр нарийвчлалтай ажиллахыг зөвлөж байна).