SARS-CoV-2 саармагжуулах эсрэгбие илрүүлэх хэрэгсэл (ELISA)
【ЗОРИУЛСАН ХЭРЭГЛЭЭ】
SARS-CoV-2-ыг саармагжуулах эсрэгбие илрүүлэх хэрэгсэл нь хүний ийлдэс болон цусны сийвэн дэх SARS-CoV-2-ыг саармагжуулах нийт эсрэгбиемийг чанарын болон хагас тоон байдлаар илрүүлэхэд зориулагдсан Өрсөлдөх чадвартай ферменттэй холбоотой иммуносорбент шинжилгээ (ELISA) юм. SARS-CoV-2-ыг саармагжуулах эсрэгбие илрүүлэх иж бүрдэл нь SARS-CoV-2-д дасан зохицох дархлааны хариу урвал бүхий хүмүүсийг илрүүлэхэд туслах хэрэгсэл болгон ашиглаж болох бөгөөд энэ нь саяхан буюу өмнөх халдварыг илтгэнэ. SARS-CoV-2 саармагжуулах эсрэгбие илрүүлэх иж бүрдлийг SARS-CoV-2 цочмог халдварыг оношлоход ашиглах ёсгүй.
【ТАНИЛЦУУЛГА】
Коронавирусын халдвар нь ихэвчлэн саармагжуулах эсрэгбиеийн хариу урвалыг өдөөдөг. Шинж тэмдэг илэрснээс хойшхи 7 ба 14 дэх өдөр COVID-19-тэй өвчтөнд сероконверцийн түвшин 50% ба 100% байна. Цусан дахь вирусыг саармагжуулах эсрэгбие нь эсрэгбиеийн үр нөлөөг тодорхойлох зорилт гэж хүлээн зөвшөөрөгдсөн бөгөөд саармагжуулах эсрэгбиеийн өндөр концентраци нь хамгаалалтын үр дүнтэй болохыг харуулж байна. Товчлуур бууруулах саармагжуулах тест (PRNT) нь саармагжуулах эсрэгбие илрүүлэх алтан стандарт гэж хүлээн зөвшөөрөгдсөн. Гэсэн хэдий ч PRNT нь нэвтрүүлэх чадвар багатай, ашиглалтад өндөр шаардлага тавьдаг тул том хэмжээний серодиагностик болон вакцины үнэлгээнд практик биш юм. SARS-CoV-2 саармагжуулах эсрэгбие илрүүлэх хэрэгсэл нь цусны дээжинд саармагжуулах эсрэгбиемийг илрүүлэх, мөн энэ төрлийн эсрэгбиеийн концентрацийн түвшинд тусгайлан хандах боломжтой Өрсөлдөөнт ферменттэй холбоотой иммуносорбент шинжилгээний (ELISA) аргачлалд суурилдаг.
【Туршилтын журам】
1. Тусдаа хоолойд бэлтгэсэн hACE2-HRP уусмалаас 120 мкл хэсгийг хийнэ.
2. Хоолой бүрт 6 мкл калибратор, үл мэдэгдэх дээж, чанарын хяналтыг нэмээд сайтар холино.
3. Урьдчилан боловсруулсан туршилтын тохиргооны дагуу 2-р алхамд бэлтгэсэн хольц бүрээс 100 мкл-ийг микропластын харгалзах нүхэнд шилжүүлнэ.
3. Хавтанг битүүмжлэгчээр таглаад 37°С-т 60 минутын турш өсгөвөрлөнө.
4. Хавтан чигжээсийг авч, хавтанг ойролцоогоор 300 мкл 1× Угаах уусмалаар нэг нүхэнд дөрвөн удаа угаана.
5. Угаах үе шатуудын дараа цооногийн үлдэгдэл шингэнийг арилгахын тулд таваг цаасан алчуур дээр дарна.
6. Цооног бүрт 100 мкл TMB уусмал нэмж, хавтанг харанхуй газар 20-25°С-т 20 минутын турш өсгөвөрлөнө.
7. Урвалыг зогсоохын тулд цооног бүрт 50 мкл Stop уусмал нэмнэ.
8. 10 минутын дотор 450 нм долгионы долгионы микропластин уншигчийн шингээлтийг уншина уу (илүү нарийвчлалтай ажиллахын тулд нэмэлт хэрэгсэл болгон 630 нм ашиглахыг зөвлөж байна.
