SARS-CoV-2 ന്യൂട്രലൈസിംഗ് ആൻ്റിബോഡി ഡിറ്റക്ഷൻ കിറ്റ് (ELISA)

【ഉദ്ദേശിച്ച ഉപയോഗം】

SARS-CoV-2 ന്യൂട്രലൈസിംഗ് ആൻ്റിബോഡി ഡിറ്റക്ഷൻ കിറ്റ്, മനുഷ്യ സെറം, പ്ലാസ്മ എന്നിവയിലെ SARS-CoV-2-ലേക്കുള്ള മൊത്തം ന്യൂട്രലൈസിംഗ് ആൻ്റിബോഡികളുടെ ഗുണപരവും അർദ്ധ-അളവുള്ളതുമായ കണ്ടെത്തലിനായി ഉദ്ദേശിച്ചിട്ടുള്ള ഒരു മത്സര എൻസൈം-ലിങ്ക്ഡ് ഇമ്മ്യൂണോസോർബൻ്റ് അസ്സെ (ELISA) ആണ്. SARS-CoV-2 ന്യൂട്രലൈസിംഗ് ആൻ്റിബോഡി ഡിറ്റക്ഷൻ കിറ്റ്, SARS-CoV-2-നുള്ള അഡാപ്റ്റീവ് രോഗപ്രതിരോധ പ്രതികരണമുള്ള വ്യക്തികളെ തിരിച്ചറിയുന്നതിനുള്ള സഹായമായി ഉപയോഗിക്കാം, ഇത് സമീപകാലത്തോ മുമ്പോ ഉണ്ടായ അണുബാധയെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. അക്യൂട്ട് SARS-CoV-2 അണുബാധ നിർണ്ണയിക്കാൻ SARS-CoV-2 ന്യൂട്രലൈസിംഗ് ആൻ്റിബോഡി ഡിറ്റക്ഷൻ കിറ്റ് ഉപയോഗിക്കരുത്.

【ആമുഖം】

കൊറോണ വൈറസ് അണുബാധകൾ സാധാരണയായി ന്യൂട്രലൈസിംഗ് ആൻ്റിബോഡി പ്രതികരണങ്ങളെ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നു. COVID-19 രോഗികളിലെ സെറോകൺവേർഷൻ നിരക്ക് യഥാക്രമം 50% ഉം 100% ഉം ദിവസങ്ങളിൽ 7-ഉം 14-ന് ശേഷമുള്ള രോഗലക്ഷണങ്ങളും ആണ്. അറിവ് അവതരിപ്പിക്കുന്നതിന്, രക്തത്തിലെ അനുബന്ധ വൈറസ് ന്യൂട്രലൈസിംഗ് ആൻ്റിബോഡി ആൻ്റിബോഡിയുടെ ഫലപ്രാപ്തി നിർണ്ണയിക്കുന്നതിനുള്ള ഒരു ലക്ഷ്യമായി അംഗീകരിക്കപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു, കൂടാതെ ന്യൂട്രലൈസിംഗ് ആൻ്റിബോഡിയുടെ ഉയർന്ന സാന്ദ്രത ഉയർന്ന സംരക്ഷണ ഫലപ്രാപ്തിയെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. പ്ലാക്ക് റിഡക്ഷൻ ന്യൂട്രലൈസേഷൻ ടെസ്റ്റ് (PRNT) ന്യൂട്രലൈസിംഗ് ആൻ്റിബോഡികൾ കണ്ടെത്തുന്നതിനുള്ള സ്വർണ്ണ നിലവാരമായി അംഗീകരിക്കപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, കുറഞ്ഞ ത്രൂപുട്ടും പ്രവർത്തനത്തിനുള്ള ഉയർന്ന ആവശ്യകതയും കാരണം, വലിയ തോതിലുള്ള സെറോഡയഗ്നോസിസിനും വാക്സിൻ വിലയിരുത്തലിനും PRNT പ്രായോഗികമല്ല. SARS-CoV-2 ന്യൂട്രലൈസിംഗ് ആൻ്റിബോഡി ഡിറ്റക്ഷൻ കിറ്റ്, മത്സര എൻസൈം-ലിങ്ക്ഡ് ഇമ്മ്യൂണോസോർബൻ്റ് അസ്സേ (ELISA) മെത്തഡോളജി അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതാണ്, ഇത് രക്ത സാമ്പിളിലെ ന്യൂട്രലൈസിംഗ് ആൻ്റിബോഡി കണ്ടെത്താനും ഈ തരത്തിലുള്ള ആൻ്റിബോഡിയുടെ സാന്ദ്രതയുടെ അളവ് പ്രത്യേകം ആക്‌സസ് ചെയ്യാനും കഴിയും.

 【ടെസ്റ്റ് നടപടിക്രമം】

1.പ്രത്യേക ട്യൂബുകളിൽ, തയ്യാറാക്കിയ hACE2-HRP സൊല്യൂഷൻ്റെ 120μL അലിഖോട്ട്.

2.ഓരോ ട്യൂബിലും 6 μL കാലിബ്രേറ്ററുകൾ, അജ്ഞാത സാമ്പിളുകൾ, ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണങ്ങൾ എന്നിവ ചേർത്ത് നന്നായി ഇളക്കുക.

3. മുൻകൂർ രൂപകൽപ്പന ചെയ്ത ടെസ്റ്റ് കോൺഫിഗറേഷൻ അനുസരിച്ച് ഘട്ടം 2-ൽ തയ്യാറാക്കിയ ഓരോ മിശ്രിതത്തിൻ്റെയും 100μL അനുബന്ധ മൈക്രോപ്ലേറ്റ് കിണറുകളിലേക്ക് മാറ്റുക.

3. പ്ലേറ്റ് സീലർ ഉപയോഗിച്ച് പ്ലേറ്റ് മൂടി 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 60 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക.

4. പ്ലേറ്റ് സീലർ നീക്കം ചെയ്യുക, ഒരു കിണറിന് ഏകദേശം 300 μL 1× വാഷ് സൊല്യൂഷൻ ഉപയോഗിച്ച് പ്ലേറ്റ് നാല് തവണ കഴുകുക.

5. പടികൾ കഴുകിയ ശേഷം കിണറുകളിൽ അവശേഷിക്കുന്ന ദ്രാവകം നീക്കം ചെയ്യാൻ പേപ്പർ ടവലിൽ പ്ലേറ്റ് ടാപ്പ് ചെയ്യുക.

6.ഓരോ കിണറിലും 100 μL TMB സൊല്യൂഷൻ ചേർക്കുകയും 20 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് 20 - 25°C താപനിലയിൽ പ്ലേറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുകയും ചെയ്യുക.

7.പ്രതികരണം നിർത്താൻ ഓരോ കിണറിലും 50 μL സ്റ്റോപ്പ് സൊല്യൂഷൻ ചേർക്കുക.

8. മൈക്രോപ്ലേറ്റ് റീഡറിലെ ആഗിരണം 10 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ 450 nm ൽ വായിക്കുക (ഉയർന്ന കൃത്യതയുള്ള പ്രകടനത്തിന് 630nm ആക്സസറിയായി ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.